手足口病EV71的实验室诊断.pdfVIP

ExperimentalLab Med．June 2008，Vol 26，No3 · 讲 座· 手足口病EV71的实验室诊断 程 献 徐咏书 中图分类号R446，Q939．4，R510．4 文献标识码C 文章编号1674—1 129(2008)03—0306—02 今年3月上旬．阜阳市几家医院陆续收治了以发热伴口 阴性 Singh等基于VP1设计了一对引物(VP1F2和VP1R2)． 腔、手足臀部皮疹为主的疾病患者，少数伴有脑、心、肺严重 成功地扩增了44株EV71分离株 f新加坡 34株．1997 1998 损害。经卫生部、安徽省和阜阳市专家的流行病学调查、临床 年：马来西亚8株，1997 1998年；日本 1株：EV71／7423／MS／ 诊断和实验室检测。确定该病为肠道病毒EV71感染 截至 87原型株 1株)。对30株其它肠道病毒进行了扩增 结果均 目前患儿死亡人数已增加到19人．感染人数增至数百人．存 为阴性_引。RT—PCR技术已成为EV71快速诊断的重要手段。 在传播扩散的威胁。EV71本身是肠道病毒71型，这个病毒 1．3 PCR方法对EV 71血清型特异性鉴定 是引起称之为手足口病 fHand． foot and mouth disease． 林思恩翻译国外文献报道：由于肠道病毒血清型是由免 HFMD)的病原体之一．手足口病这个病传染性比较强，是一 疫血清与病毒膜蛋白的中和反应鉴定的．故膜蛋白区的核苷 种世界性的疾病，如美国、英国、日本，包括台湾地区与香港 酸及氨基酸序列与其血清型相关 经过对EV 71和CA 16V 也有．在前些年国内也出现过类似的疫情 P1区内及其周边氨基酸序列的分析．发现了血清型特异基 肠道病毒71型 (EV711是小RNA病毒科肠道病毒属成 序的存在．据此设计出两对EV 71特异性 PCR引物一Primer 员．其核酸为单股正旋 RNA．通过检测 VP1序列即可将 92S／93A和Primer 159S／162A。诊断性引物P rimer 92S／93A EV71与其他小RNA病毒区别开来 EV71可引起手足口病 编码基序V EL兀 YM f、，P1—123到V P1—129)和C唧 G fE／ (HFMD)、脑干脑炎、无菌性脑膜炎、脊髓灰质炎样麻痹、疱疹 0／R)V(VP1—140到VP1—146)；另一对用于测序及分子流行 性咽峡炎、神经源性肺水肿、肺出血、病毒性心肌炎等多种疾 病学研究的引物 Primer 159S／162A编码基序 TM KI￡KD 病。 fVP3—225到VP3—232)和VACTPTG(V P1—138至0 VP1—144) 为了能对手足口病做到早发现、早报告、早诊断、早治 考虑到EV 71氨基酸序列的变异及密码子的简并性．所有 疗．实验室的诊断尤为重要，确定诊断是在临床诊断的基础 四个引物均含由混合碱基组成的简并核苷酸．且Primer 92S／ 上．EV71核酸阳性、分离出EV71病毒或EV711gM抗体检测 93A在四重密码简并处还含脱氧次黄嘌呤核苷 将这两对引 阳性．EV71IgG抗体4倍以上增高或阴性转为阳性．以下就 物用RT—PCR检测经常规方法确诊的标本．均显示出对 EV 有关方法学作一讨论： ． 71的高度特异性 两对引物都可扩增Ev 71的RNA模板f 1特异性EV7I核酸阳性或分离到EV71病毒：目前较常 Primer 92S~3A：20／20：Primer l59s／162A：125／125)．而对与之 用的仍为病毒培养分离及RT—PCR等 密切相关的肠道病毒和CA 16都无相应的