甘肃鹏程生物科技发展有限公司2培养基配制21.PPT

293T细胞在不同血清及不同浓度血清中的生长能力测试对比 细胞培养学习成果报告 赵锋 2016.6.19 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 厂商 产品 货号 批号 Biological Industries Test进口NBCS 04-102-1 ? Biological Industries FBS 04-001-1 ? Biological Industries DMEM-Hg 01-100-1 ? Biological Industries PBS 02-024-1 ? Biological Industries 胰酶 03-050-1 ? CORNING T25 V119297 ? ? 备注：用 ____________ 细胞培养 I. 实验目的：293T细胞在不同血清及不同浓度血清中的生长能力测试对比。 II. 实验材料： 宿主细胞来源：中国科学院上海细胞系 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 Ⅲ.实验步骤： 1.细胞培养前操作程序 1.1 操作前准备步骤 1.1.1 培养基与胰酶等需用试剂，由冰箱取出，置于室温回温备用；同时开启生物操作柜风机和紫外光灯管电源，杀菌10-15分钟后切换至日光灯照明。 1.1.2 确认C02培养箱与自制培养箱的温度设定应为37?C，二氧化碳浓度应为5 %。所有操作步骤中，要进入生物操作柜的物品，都必定要均匀喷洒过75%的酒精才可进入生物操作柜。操作人员戴上手套的手，进入生物操作柜之前，也需均匀喷洒过酒精。 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 2.培养基配制 2.1 配制三种培养基 DMEM-Hg+10%FBS DMEM-Hg+10%NBCS DMEM-Hg+20%NBCS 2.2无菌测试实验 取一个六孔板，每个孔加入3ml培养基，每 种培养基做两个平行，放入培养箱中培养3天，中间连续观察六孔板菌落生长情况。 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 2.2 培养基成分以及作用 培养基: 缓冲盐, 氨基酸, 维生素, 醣/碳源. 血清/生长因子: 生长因子, 贴壁因子... 培养环境: 氧气: 参与能量代谢. 5%二氧化碳: 维持酸碱平衡. 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 Glutamine为细胞主要ATP来源. 易分解, 半衰期: 4℃为一个月, 37 ℃约一周. BI基础培养基: 4 ℃一年, 谷氨酰胺 100mg/L. 血清: 生长因子, 蛋白质, 脂肪, 醣类. 血清替代物: 生长因子/蛋白质. 贴壁试剂: 细胞外基质, 促贴壁因子. 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 3.细胞解冻 购买的细胞通常会将细胞、培养基和抗冻剂混合之后装在冷冻小管中冷冻并存放于液态氮桶。在开始细胞培养时，需将冷冻小管解冻。 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 3.1操作过程 将冷冻小管（293T细胞）由液氮中取出置于室温回温当小管外面的霜溶化后就可拿到生物安全柜中操作以五毫升移液管吸取4mL新鲜培养基小心冲散管内冰块。用移液管将全部溶液转移至干净的15 ml离心管中，再加入5mL新鲜培养基，拿到离心机以1000 rpm离心5分钟。 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 至生物操作柜中倒掉上清液，用移液管将残余液体吸走。 用干净的移液管抽取新鲜培养基，以吸放的方式将离心管中的细胞悬浮起来之后，即可将细胞与培养基转移至培养皿中，将培养皿放入培养箱中来培养。 甘肃鹏程生物科技发展有限公司 隔日，为移除可能残余的抗冻剂，移除培养皿中原有的培养基，用移液管再次加入新鲜的培养基，继续于培养箱中培养。至此完成细胞解冻培养的程序。 观察无菌测试结果，在倒置显微镜下可以看到血清中的纤维凝结，无菌落生长，可以使用。 甘肃鹏程生物科技发展有限公司