rna干扰技术对pc12细胞cam kiiβ 基因表达的影响.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2008, 28 (2) : 76 ～79 技术与方法 RNA 干扰技术对 PC12细胞 C aM KIIβ 基因表达的影响 刘建功 　王江涛 　解 　军 (山西医科大学基础医学院　太原 　03000 1) β β 摘要 　观察 RNA 干扰表达载体对 PC 12 细胞中 CaM KII 基因的抑制作用 。构建针对 CaM KII 基 因的 RNA i质粒表达载体 ,脂质体法转染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤 PC 12 细胞株 ,应用逆转录 - 聚合 ( ) β 酶链反应 R TPCR 、W e stern b lot检测其对 CaM K II mRNA 及蛋白质水平的影响 。构建的质粒表 β 达载体在 PC 12 细胞中抑制了 CaM K II mRNA 及蛋白质的表达 。与阴性对照组相比,表达质粒产 β 生的 siRNA 对 CaM K II mRNA 的抑制率 48h , 72h 分别为 46. 40% , 64. 69% ,蛋白抑制率 72h 约为 β 74. 77% 。RNA i表达载体可以有效地抑制 PC 12 细胞 CaM KII 基因的表达 。 关键词 　RNA 干扰 　短发夹 RNA 　基因表达 　CaM K II 中图分类号 　Q 819 ( 2 + β 　　钙 离 子 /钙 调 蛋 白依 赖 的 蛋 白激 酶 Ca / CaM K II mRNA 及蛋白质表达的影响 。 ) calmodu lin dep endent p rotein k ina se, CaM K 代表一组能 2 + 2 + 1　材料与方法 与 Ca / CaM 结合并被激活的蛋白激酶家族 ,在 Ca 信号转导中发挥多种生物学效应 。同时这个 CaM K信 1. 1　材 　料 号转导系统还可以与 ARK, PKB 和 MA PK激酶发生交 　　大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤 PC12 细胞株 ,购 自中国协 叉作用 ,调节神经递质的合成和释放 ,基因表达和细胞 和医科大学细胞中心 。p Gene sil1 质粒载体 由武汉晶 凋亡等 多种 生 物 功 能 [ 1 ] 。目前 研 究 最 清 楚 的是 赛公司提供 , 脂质体转染试剂 , RNA 抽提试剂购 自 ( ) CaM K II, 具有广泛的生物学活性 , 并发现其与凋亡有 Invitrogen 公司 ,逆转录 聚合酶链反应 R TPCR 试剂 [ 2 ] β 盒 , T4 DNA L igase, B am H I, H in d Ⅲ, S a l I, Pst I 购 自 关 。CaM K II的 亚基具有蛋白激酶的活性 ,作用的