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功能性131整合素一gfp融合蛋白稳定过表达肝癌细胞系的建立
生堡赶塑处登銎查!!!!生!!旦箜!!鲞筮!!塑g廷i里』旦!塑!!!i!堕型坠堡!Q堕垫!!!y!!：!；!堕垒!! ·实验研究· 功能性131整合素一GFP融合蛋白稳定 过表达肝癌细胞系的建立 张浩 刘小方 董明 赵梅芬 沈小东 马志刚 郭克建 【摘要】目的建立p1整合素一绿色荧光蛋白(GFP)稳定过表达人肝癌细胞系并检测其对各基 质蛋白的黏附能力。方法 构建p1整合素一GFP融合蛋白真核细胞重组表达质粒，并将其转染至人 肝癌Hep3B细胞，建立稳定过表达阻整合素的肝癌细胞系。利用RT—PCR，Western印记，免疫沉降 和荧光显微镜观察融合基因；检测转染细胞的增殖情况及对各基质蛋白的黏附能力。结果获得p1 整合素一GFP融合蛋白稳定转染过表达Hep3B细胞系；转染的|31整合素能与内因性a1，d5，a6整合 素亚型形成二聚体；转染阻整合素对细胞增殖无明显影响，但使细胞对各基质蛋白的黏附能力明显 增高。结论建立了功能性p1整合素-GFP稳定过表达的人肝癌细胞系，为进一步研究Bl整合素基 因的功能提供了一个有效的细胞系。 【关键词】癌，肝细胞；lal整合素；肿瘤细胞系；基因转染 Constructionandcharacterizationof fusion stablepl-integrin-GFP HOCcelllines geneoverexpressing ZHANGHn0’，LIUXiao 0General First f口ng，DONGMing，eta1．’Departmentf Surgery，the Medical 110001，P．R．China AffiliatedHospital，ChinaUniversity，Shenyang ToestablishafunctionalHCCcellline [Abstract]Objective overexpressing171一integrin-GFP fusion vector fusionDNAwas gene．MethodsEukaryoticexpressionencoding171一integrin-GFPgene constructedbyPCRandtransfectedintothehumanHCC cells，andthestabletransfectants Hep3B were fusionwasexamined isolated．The byRT-PCR，western p1一integrin-GFPgene blotting．immu— andfluorescence andadhesiontoextracellularmatrix noprecipitation microscopy．Theproliferation ofthesecellsweredetermined．ResultsAHCCcellline (ECM)proteins stablyoverexpressing131一in— fusion wasestablished．Thetransfected coulddimerizethe tegrin-GFPgene B1一integrin endogenous anda6 d1，d5 transfectionhadnoeffecton cell i
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