全柱成像cief 技术在蛋白检测中的应用 - 仪器谱.pdfVIP

全柱成像cIEF 技术在蛋白检测中的应用 李斌，欧阳伟民，于世建 （北京绿绵科技有限公司，北京，100080） 1 摘要：全柱成像检测—毛细 管等电聚焦电泳是1992 年发展起来的一项检测技术，具有分析 速度快、重复性好、测定准确等特点，是蛋白药物分析、食品蛋白研究强有力的工具。 关键字：全柱成像检测；毛细管等点聚焦；蛋白药物；食品蛋白 Applicationsof capillary isoelectricfocusing with whole column imaging detection in protein analysis Li Bin, Ouyang weimin, Yu Shijian (Beijing Lumiere Tech Limited ，Beijing ，100080，China ) Abtract ：Capillary isoelectric focusing - Whole column imaging detection is a protein detection technology developed in 1992, It is a strong powerful tool for protein drug analysis and food protein research based on its fast analysis speed, good reproducibility and accurate determination. Key words ：capillary isoelectric focusing ；whole columnimaging detection ；Protein drugs ；Food protein 等电点 (isoelectric point, pI) 是蛋白质的最重要理化性质之一，每一种蛋白质都有其特 定的 pI ，其能反应蛋白质的空间结构、均一性以及功能性结构的变化，准确测定蛋白质的 pI 值在蛋白基础研究、蛋白质药物以及食品功能蛋白表征方面有着重要意义。毛细管等电 聚焦（Capillary Isoelectric Focusing, cIEF ）是一种根据蛋白质等电点pI 不同而进行分离的技 [1] 术，是蛋白质等两性分子分析最有力的工具之一 。传统的cIEF 采用单点检测方式，即所 有样品在毛细管内分离完成后形成稳定的聚焦区带后再依次到达检测器检测，通常从形成 pH 梯度到样品聚焦完成通常只需要几分钟，而聚焦区带依次通过检测器却需要 10～ 40min[2] 。移动过程不仅使得分析时间变长，影响了分析的速度和通量，而且蛋白分离区带 还会因为移动发生区带展宽而影响分离度和分辨率，同时还可能导致蛋白质沉淀。 全柱成像检测—毛细管等电聚焦电泳( capillary isoelectric focusing electrophoresis- whole [3-8 column imaging detection ，cIEF-WCID) 是1992 年发展起来的一项检测技术 ] 。cIEF-WCID 作者信息：李斌，男，技术工程师，bin_li@ 克服了传统单点检测cIEF 的不足，采用一个动态检测器对蛋白质在整个分离通道内不同时 间与不同位置上发生的任何变化进行实时监测，省去了繁琐的区带移动过程，既缩短了分析 时间，又保证了蛋白质的分离度和分辨率，使得蛋白质pI 值的测定变得简单，目前已成为 抗体药物研发、蛋白质组学研究和生物相互作用机制探索以及食品蛋白分析的强有力工具。 1. cIEF-WCID 技术 图1 为cIEF-WCID 的原理示意图。蛋白质样品与两性电解质载体及添加剂的混合物从 毛细管分离柱（长度5cm）的一端充入，在阳极液与阴极液之间施加分离电压 启动聚焦过 程，UV 检测光源通过透镜后