人源蛋白酪氨酸磷酸酶shp-2 基因克隆与原核 - 国家药物筛选中心.pdfVIP

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2017-09-02 发布于天津
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人源蛋白酪氨酸磷酸酶shp-2 基因克隆与原核 - 国家药物筛选中心.pdf

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人源蛋白酪氨酸磷酸酶shp-2 基因克隆与原核 - 国家药物筛选中心

846 · · 现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.14 NO.5 FEB.2014 DOI: 10.13241/ki.pmb.2014.05.012 人源蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2 基因克隆与原核表达* 庞晓斌 1 刘永真 2 谢欣梅 1 李晓婷 1 赵清辉 1 杜冠华 3△ (1 475004 2 475004 河南大学药物研究所河南开封；河南大学医学院河南开封； 3 100050) 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所国家药物筛选中心北京摘要目的：构建蛋白酪氨酸磷酸酶 SHP-2 的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。方法：以人脑组织 mRNA 为模板，通过 RT-PCR 扩增出目标 cDNA ，构建蛋白酪氨酸磷酸酶 SHP-2-pEASY-E1 重组质粒。将重组质粒转化进 E.coli TOP10 感受态细胞中，通过菌落 PCR 和测序进行阳性克隆的筛选和验证，将正确的质粒转化 E.coli Transetta 感受态细胞中，通过 SDS和 western-blot 进行蛋白检测和验证，酶促动力学分析 SHP-2 可溶性蛋白的活性。结果：成功克隆 SHP-2 功能域，构建 SHP-2-pEASY-E1 原核表达 Km=0.97mmol/L Vmax 13.57mmol/L/s 载体，完成可溶性蛋白的表达；酶促动力学分析结果为：米氏常数，为。结论：本研究成功构建 SHP-2 的原核表达载体，重组表达的 SHP-2 蛋白具有较高的磷酸酶活性。 SHP-2 关键词：；基因克隆；蛋白表达 Q75, Q78, Q55 A 1673-6273 2014 05-846-04 中图分类号：文献标识码：文章编号：（） Cloning and Prokaryotic Expression of Human Protein Tyrosine Phosphatase SHP-2* 1 2 1 1 1 3△ PANG Xiao-bin , LIU Yong-zhen , XIE Xin-mei , LI Xiao-ting , ZHAO Qing-hui , DU Guan-hua (1 Pharmaceutical Institute, Henan University, Kaifeng, Henan, 475004, China; 2 Medical college of Henan University, Kaifeng, Henan, 475004, China; 3 National Center for Pharmaceutical Screening, Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking