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多器官功能障碍综合征患者外周血单个核细胞凋亡的研究 中文摘要 多器官功能障碍综合征患者外周血 单个核细胞凋亡的研究 中山大学附属第一医院急诊科 硕士研究生：梁艳冰 导 师：马中富副教授 中文摘要 近年，尽管对MODS本质的认识逐步深入，同时MODS临床防治手段也不 断改善，但是，MODS的发生率和病死率仍未明显降低，仍然是危重患者死亡 的重要原因之一，其发病机制复杂，仍未清楚。大量的研究表明，外周血单个核 细胞(PBMCs)在创伤、感染等致病因素作用下异常活化，出现功能、数量的异常， 是参与MODS发生发展的重要细胞。细胞凋亡是维持细胞数目稳态及其功能的 重要生理机制，而MODS患者存在多种影响PBMCs凋亡的病理生理变化。因此， 达可能异常。为此，我们将从下列几个方面对其进行研究：(1)采用流式细胞仪 法、电子显微镜、荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳法观察MODS患者外周血单个 促凋亡基因p53的mRNA的表达量，探讨其与PBMC凋亡的关系。 、材料与方法 1．研究对象 符合1991 例、手术仓q伤后9例、严重感染脓毒症9例、失血性休克2例。对照组为与MODS 患者年龄、性别相匹配的健康志愿者18人，男lO人，女8人，年龄46．2+3．8 岁(20～70岁)。MODS患者均没有接受抗肿瘤药物、放射治疗、激素治疗者，均 多器官功能障碍综合征患者外周m单个核细胞捌亡的铆f究 中文摘要 非移植患者、人类免疫缺陷病毒感染(艾滋病)者、粒细胞减少症者。所有患者于 48小时内采血，健康志愿者晨起空腹采静脉血，每次采血10mL。 诊断MODS 2．实验方法 V／PI染 PBMCs的分离采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法。采用Armexin 色流式细胞仪法，吖啶橙一溴化乙锭染色荧光显微镜、电镜观测，DNA琼脂糖电 mRNA及p53mRNA的表达，以B—actin为内参照，计算相对单位。 3．统计学分析 均数比较采用方差分析，相关分析采用简单相关分析法，以P0．05为差异 有统计学意义。 二、结果 1．电镜、吖啶橙一溴化乙锭染色荧光显微镜均观察到MODS患者PBMCs 出现凋亡的典型形态学改变，MODS组DNA琼脂糖电泳可见“梯形电泳条带” 组和对照组均可见到PBMCs凋亡。 ±9．21％，高于对照组的15．9±6．75％(P0．01)：吖啶橙染色荧光显微镜法测定， 4-O．028 个／HPF(JD0．05)。 评分、PBMCs凋亡率、PBMCs平均凋亡细胞数均高于存活患者，但差异没有统 计学意义(P0．05) 4．MODS组和对照组PBMCs P53的 PBMCs平均凋亡细胞数的相关系数分别为0．007、0．014(e0．50)。 mRNA表达水 6．MODS患者PBMCs凋亡率(流式细胞仪法)与Bcl一2和p53 多器官功能障碍综合征息者外周f|【L单个核细胞捌f的研究 中文摘要 PBMCs平均凋亡细胞数(吖啶橙染色荧 平的相关系数分别为o．12、0．21(PO．05) mRNA 光显微镜法)与Bcl·2和p53表达水平的相关系数分别为0．19、 O．23(P0．05)。 三、结论 本研究显示多器官功能障碍综合征病人PBMCs凋亡异常增高，PBMCs抗凋 亡基因Bcl一2