细粒棘球蚴生发层细胞系的建立 - 中国寄生虫学与寄生虫病杂志.pdf

Ch in e se Jou rn a l o f P ara sito logy an d P ara sit ic D isea se s ·353 · 细粒棘球蚴生发层细胞系的建立 刘金明　顾惠明　王爱华　陈燕军 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所　上海　200232 　　提要 目的: 为获得能在体外稳定繁殖的细粒棘球蚴细胞系。方法: 用研磨法将绵羊源细粒棘球 蚴生发层处理得分散的生发细胞, 将其在含 10% —20% 小牛血清的R PM I 1640 培养基在 24 孔培 养板和包被胶原的 24 孔细胞培养板上交替培养至 14 代, 随后在常规 24 孔培养板上连续传代培 养; 用倒置显微镜观察细胞形态及生长繁殖情况; 将培养细胞接种 小鼠以观察其形成继 BALB c 发性包囊的能力; 用 EL ISA 法研究细胞系抗原的免疫学特征。结果: 生发层细胞已在体外连续培 养 75 代以上, 生长 良好; 细胞系细胞呈圆形, 具有形成合胞体乃至类组织块的趋势, 在 4 ℃冰箱中 至少可保存半个月, 在液氮中至少可保存 10 个月; 将细胞接种 小鼠后 3 个月至 7 个月, 解 BALB c 剖未见细粒棘球蚴包囊生长; 细胞系抗原可和抗生发层体抗原、原头节可溶性抗原、囊液抗原的小 鼠血清及人工感染原头节的阳性小鼠血清起反应。结论: 细粒棘球蚴生发层细胞系已经建立。 关键词　细粒棘球绦虫　生发细胞　细胞培养　连续细胞系 ( ) 　　棘球蚴病 又称包虫病 是世界性分布的 大块组织沉淀后吸取上清, 379 g , 10 m in 离 人兽共患绦虫病。其高发区约占全国面积的 心。沉淀用R PM I 1640 不完全培养基洗涤 2 40% , 上百万人受到威胁。病畜超过 4 000 万 次得分散的生发细胞。 头, 每年新发病牲畜达 800 余万头, 年经济损 细胞培养 ( 失超过 10 亿元。目前对本病尚无理想的治疗 用 R PM I 1640 完全培养基 含 10% - ) 方法, 犬粪管理和感染脏器的处理难以实施, 20% 小牛血清 将上述生发细胞培养于 5% 采用“犬犬投药、月月驱虫”的单相灭绝病原, CO 2 37 ℃恒温箱中。培养器皿在 1 代—14 代 这一防治模式仅取得局部地区的防治效果, 交替为包被胶原蛋白的 24 孔培养板和常规 所以, 研制抗细粒棘球绦虫疫苗的重要性 日 24 孔培养板, 当细胞增殖培养一定时间后, 趋明显。对细粒棘球蚴细胞进行体外培养并 吸去上清, 加入新鲜培养液, 根据细胞数量及 建立细胞系, 是探索体外生产抗原进而研制 增殖速率按一定比例传代。 疫苗的一条途径。本文对细粒棘球蚴生发层 细胞系生物学特性观察 细胞系的建立进行了初步探索。 用倒置显微镜观察细胞形态及生长与增 殖情况。用有限稀释法对细胞计数, 再根据接 材料与方法