试剂条（食品安全类）-深圳容金科技有限公司.doc

REAGEN?利巴韦林检测试剂盒 RND99081 【产品简介】 利巴韦林 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析猪肉、鸡肉、饲料样品中利巴韦林残留。 【测定原理】 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物利巴韦林和微孔条上预包被的偶联抗原竞争利巴韦林抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物利巴韦林的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物利巴韦林的含量。 【试剂盒技术指标】 规 格：96孔/盒 灵 敏 度： 0.2ppm 检测时间： 75min 样本检测下限： 组织……………………………………………200ppb 饲料、谷物、玉米、花生、豆类……………20ppm 反应率： 利巴韦林……………………………………100% 回收率： 组 织…………………………………………75±10% 饲 料…………………………………………75±10% 【试剂盒组成】 微量测试孔：（1X96孔板）每条8孔，一板12条 标准液X6瓶：（1ml/瓶） 0ppm、、、ppm、1.6ppm、3.2ppm 酶标记物 12ml…………………………红色帽 抗体工作液 7ml…………………………绿色帽 底物液 A液 7ml…………………………棕色帽 底物液 B液 7ml…………………………黑色帽 终 止 液 7ml…………………………黄色帽 20X浓缩洗涤液40ml…………………… 白色帽 5X浓缩样品稀释液50 ml…………………蓝色帽 【所用仪器、试剂】 仪 器：微孔板酶标仪450nm/630nm、旋转蒸发仪/氮气吹干装置、均质器、振荡器、离心机、 刻度移液管、天平（感量0.01g ）微量移液器：单道 20μl～200μl、100μl～1000μl、多道 250μl 试 剂：甲醇、正己烷、滤纸 【实验前溶液配制】 配液1、样品提取液： 70%甲醇溶液30ml蒸馏水或去离子水和70ml纯甲醇混合制备70％甲醇溶液。 配液2、 将2X浓缩样品稀释液用去离子水按照1：1稀释（1 份浓缩样品液+1份去离子水）用 于样品的稀释。 配液3、 将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份 去离子水），或按所需用量配制洗涤液。 【样本前处理步骤】 处理任何样本时，都必须注意： （a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （b）实验之前须检查实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。 （a）组织 称取5g样品于50ml离心管中，加入10ml甲醇，强力振荡5min；室温4000r/min以上，离心10min。 取2ml上清液，于50℃水浴中氮气/空气吹干。 用1ml正己烷溶解残留物，加入1ml稀释后的样品稀释液混合30s；室温4000r/min以上，离心5min， 取50ul下层溶液进行检测分析。 稀释倍数:1 （C）饲料、谷物、玉米、花生、豆类 1、称取2g粉碎的样品于50ml离心管中，加入10ml 的提取溶液混合；强力振荡5分钟。 2、用Whatman No.1滤纸过滤；收集过滤液。 3、取出上清液50ul与样品稀释液950ul 充分混合30s，取50ul进行检测分析。 稀释倍数:100 【酶标免疫分析程序】 操作步骤： 将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 按板架及需要取出微孔条，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。 加标准品/样本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗体50μl/孔，用盖板膜封板，轻轻震荡混匀。25℃环境中反应30min。 取出将孔内液体甩干，用洗液250μl/孔洗板4-5次，每次间隔15-30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。 每孔加入酶标记物100μl，盖板膜盖板后置25℃环境中反应30min。将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗，4-5遍（同上），用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。 显色：每孔加入A液50μl，再加B液50μl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。 测定：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测,在5min内读完数据）测定吸光度值（OD值）。 【结果判定】 结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与利巴韦林的含量成负相关