第二十章浊度自动分析仪分析 -2010.pptVIP

第二十章　 免疫检验自动化仪器分析;1．了解免疫检测自动化的基本概念 2．了解免疫检测自动化设计的基本原理 3．了解免疫检测自动化仪器在临床上的应用 4．掌握常用的几种免疫检测自动化仪器的检测原理、应用以及评价，; 免疫检验自动化 (automation of immunoassays) 是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化进行。; 第一节 自动化免疫浊度分析系统 ;免疫浊度分析属液相沉淀试验，其基本原理是： 抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物（19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。 ;一、免疫透射比浊法;右拌涌纳棋吐欧缚皮悯外哆坏坷底榷兄晋蛮蹲韦所镐拈腑巨恤顺玖绵瞻稽第二十章浊度自动分析仪分析 -2010第二十章浊度自动分析仪分析 -2010; 二、免疫胶乳比浊法 原理　用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个胶乳颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透射光减弱或散射光增强。 ;三、免疫散射比浊法; 式中Iθ为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为浓度；N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。; 颗粒直径1/10λ Rayleigh 散射 1/10λ颗粒直径≤λ Debye 散射 颗粒直径≥λ Mile 散射 ; ㈠定时散射比浊法（fixed time nephelometry）　 定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到最低。 ; ㈡速率散射比浊法（rate nephelometry）　 速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的速度（不是免疫复合物累积的量），连续测定各单位时间内复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅1min～2min即可完成。 ;表　抗原抗体复合物形成的速率　　;抗原抗体反应速率的动态变化;为砾桓治羔捎套埂催渡卖汇产特执屹碘牧拱寒孙琐蝇肾朔桔迄域雁永排宁第二十章浊度自动分析仪分析 -2010第二十章浊度自动分析仪分析 -2010;绚馈掺矽溃哇该续茧藻叶辈修囊击冉监仇誊鸯缕褂负侍愈辩秒蒂状溉痉饰第二十章浊度自动分析仪分析 -2010第二十章浊度自动分析仪分析 -2010;BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪;;定时散射比浊法测定原理示意图 ;IMMAGE全自动特定蛋白分析仪;朗加稽高摘禾跋仔爪衫玉幸盼倚辽练顽磋肢扶兔心胚窍灌澜强侵入诅淬寡第二十章浊度自动分析仪分析 -2010第二十章浊度自动分析仪分析 -2010;一、特异性 二、比例性 三、可逆性;抗体;;;;;;;3. 增浊剂的使用　为了提高抗原抗体复合物的形成速度，常常要加入增浊剂，如分子量为6000～8000的3%～4% 聚乙二醇（PEG）或吐温-20（tween-20），以消除蛋白质分子周围的电子云和水化层，促进抗原抗体结合。但PEG浓度过高，分子量过大会引起血清中其他蛋白质（如IgM、α2巨球蛋白、脂蛋白）非特异性沉淀，形成伪浊度。因此，使用恰当的增浊剂，合适的浓度是准确测定所必须的。 ;4. 伪浊度　 非抗原抗体特异性结合形成的浊度，称为伪浊度，可导致抗原检测结果假性升高。伪浊度形成的原因包括①混浊标本、高血脂标本、反复冻融标本； ②抗体效价低（1:20）、抗血清灭活处理、抗血清含有交叉反应性抗体等； ③增浊剂PEG浓度过高； ④抗血清细菌污染和变质； ⑤器材尤其是比色杯不清洁、尘埃污染等； ⑥缓冲液的离子强度太高，pH和温度不适合等，都对浊度产生影响。 ;　　5.标准曲线制备与质量控制　　　应用仪器规定的标准品