酶消化法联合组织块法培养大鼠原代成骨细胞.docVIP

酶消化法联合组织块法培养大鼠原代成骨细胞 丁香莹1，蔡劲薇2，潘吉铭1，梁 敏2 (1广西医科大学第一附属医院，广西壮族自治区南宁市 530021；2广西医科大学第一附属医院内分泌科，广西壮族自治区南宁市 530021) 引用本文：丁香莹，蔡劲薇，潘吉铭，梁敏. 酶消化法联合组织块法培养大鼠原代成骨细胞[J].中国组织工程研究，2017，21(): 1833-1837. DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.12.005 ORCID: 0000-0002-9814-8091(梁敏) 文章快速阅读： 文题释义： 组织块法：在成骨细胞原代培养中，组织块法是最简捷和经常使用的方法。将组织块剪成小碎块后逐依接种于培养瓶，细胞会从贴壁的组织碎块的边缘缓慢爬出，直至爬满整个培养瓶。 酶消化法：另外一种提取原代成骨细胞的常用方法是酶消化法。采用胰酶或胶原酶对组织块进行消化分离细胞，但是胰酶或胶原酶的用量和浓度较难控制，浓度过大或过小都不合适。 摘要 背景：获取高纯度、高活性的成骨细胞是进行骨代谢研究的基础。 目的：探索一种简便、高效的原代成骨细胞培养方法。 方法：将新生24 h内的SD大鼠，分离获取颅骨的顶骨和额骨，预先采取胰酶和胶原酶消化，再进行组织块培养的方法提取成骨细胞。通过倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态，细胞计数绘制细胞生长曲线，采用碱性磷酸酶BCIP/NBT染色和茜素红矿化结节染色进行成骨细胞鉴定。 结果与结论：①细胞形态呈长梭形、三角形、不规则多边形，有两至三个细胞突起；②透射电镜下线粒体和内质网在成骨细胞中非常丰富，并且有较多细胞突起，呈现出典型成骨细胞特点；③细胞刚接种时生长缓慢，3 d后增殖加快，第7天达高峰；④碱性磷酸酶BCIP/NBT染色显著阳性，茜素红钙结节染色橘红色；⑤采用酶消化法联合组织块法提取的细胞具有典型的成骨细胞特征和功能，是一种理想的原代成骨细胞分离培养方法。 关键词： 组织构建；骨细胞；大鼠；成骨细胞；原代培养；酶消化法；组织块法；鉴定；国家自然科学基金 主题词： 成骨细胞；细胞培养技术；胰酶；胶原酶类；组织工程 基金资助： 国家自然科学基金资助项目 Culture of rat primary osteoblasts using enzymatic digestion combined with tissue explant method Ding Xiang-ying1, Cai Jing-wei2, Pan Ji-ming1, Liang Min2 (1the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China; 2Department Endocrinology, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi Zhuang Autonomous Region, China) Abstract BACKGROUND: Osteoblasts with high purity and activity are essential for bone metabolism research. OBJECTIVE: To explore a simple and effective culturing method of primary osteoblasts. METHODS: Osteoblasts were isolated from the parietal and frontal bones of newborn Sprague-Dawley rats using trypsin and collagenase digestion and tissue explant method. The morphology of osteoblasts was observed by inverted phase contrast microscope and transmission electron microscope; the cells was counted to draw the growth curve; the osteoblasts were identified by alkaline phosphatase BCIP/NBT staining and alizarin red staining.