番泻叶提取物诱导小鼠结肠组织中蛋白质的差异表达论文.docVIP

　　番泻叶提取物诱导小鼠结肠组织中蛋白质的差异表达论文 .freelide gel electrophoresis（PAGE）for investigating the different expression of colonic proteins in BALB/c mice induced by extract of senna，and to lay the foundation for screening and characterization of biological molecules mediating the effect of senna from the gastroin-testinal tract.METHODS The model of chronic gastroin-testinal motility hyperfunction in mice inistration of senna extraction.The proteins of colon control and model mice.The2-D PAGE ized for analyzing the different expression of proteins.The2-D PAGE gels al model of chronic gastrointestinal motility hyperfunction ice.Optimized2-D PAGE displayed the different expressional proteins in gas-trointestinal tract of model mice.CONCLUSION The dif-ferent expression of colonic proteins can be induced by extract of senna in BALB/c mice.These proteins maybe mediate the effect of senna in gastrointestinal tract. 0 引言 胃肠运动障碍是目前消化系统中最常见的疾病之一，研制新型的胃肠动力药物也是当今的热点.番泻叶是具有促进胃肠运动作用的传统中药，由于它的化学成分复杂，目前对其作用机制尚不清楚.我们通过建立小鼠胃肠运动增强模型，用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术观察其结肠组织中蛋白质的差异表达，研究番泻叶致泻和促进胃肠运动作用的分子机制，筛选和鉴定胃肠道组织中介导番泻叶作用的蛋白质分子，为研制新型的胃肠动力药物奠定基础. 1 材料和方法 1.1 材料 印度进口番泻叶购自陕西省药材公司，经第四军医大学药物研究所鉴定为狭叶番泻叶，番泻叶提取物由第四军医大学药局制备，番泻叶经蒸馏水洗后，100℃煮沸10min，过滤后的沉渣再加水煮沸10min，收集滤液于70～80℃减压浓缩成流浸膏，浓度为1kg L-1 生药，封装于高压消毒的玻璃瓶中，-20℃冻存备用.丙烯酰胺，甲叉双丙烯酰胺，SDS，三（羟甲基）氨基甲烷，苯甲基磺酰氟均购自华美生物工程公司，超纯尿素购自上海生物工程公司，两性电解质pH3.5～10，pH6～8购自上海丽珠东风技术有限公司，GF-1高速组织分散器为江苏麒麟医用仪器厂生产.DYY-Ⅲ26型双向电泳槽和梯度混合器为六一厂生产，电泳仪为Bio-Rad公司生产. 1.2 方法 1.2.1 慢性胃肠运动增强模型的建立 BALB/c小鼠40只，8L，1次 d-1 ，小鼠均可见明显腹泻，水样便和稀粪，2～3d后见小鼠腹泻症状减轻即增加剂量和灌胃次数，至6L，3次 d-1 ，小鼠均腹泻不止，明显消瘦，而对照组则灌以蒸馏水，次数和液体体积与模型组相同. 1.2.2 小鼠结肠组织蛋白质的提取 实验前12h禁食，不禁水.于灌药后3h，3mol L-1 PMSF）中清洗干净.立即液氮中速冻，然后移至-70℃冰箱保存，此过程均在9min之内完成.配制组织裂解液，参照文献［1］，尿素9.5mol L -1 ，20g L-1 NP-40，20g L-1 2-ME，20g L-1 pH3.5～10的两性电解质，1.5mmol L-1 MPSF，去离子水配制，（分装后-70℃冻存），称量小鼠结肠组织，按每份组织加5份组织裂解液（m/V）的比例加入裂解液，于冰水中制备组织匀浆，3500r min-1 ，5s×5，然后加DNA和RNA酶，终质量浓度各为0.4g L-1 ，在冰上孵育10min后，以10000g，10min离心，取上清分装贮存于-70℃，同时用Bradford法测定提取液中蛋白质浓度［2］ . 1.2.3 蛋白质