番荔枝内酯对人淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响论文.docVIP

　　番荔枝内酯对人淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响论文 .freelL分级作用于细胞。采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化染色检测各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达情况。结果 番荔枝内酯组细胞增殖率均低于未干预组,25、50 μg/mL药物浓度组细胞增殖率低于阿霉素组,增殖率与浓度及培育时间负相关；番荔枝内酯组细胞凋亡率高于未干预组,25、50 μg/mL药物浓度组凋亡率高于阿霉素组,和浓度、时间正相关；与未干预组相比,番荔枝内酯组caspase-9表达量逐步增加,与阿霉素组比较,6.25 μg/mL组caspase-9表达低于阿霉素组(P＜0.05),50 μg/mL浓度组表达高于阿霉素组(P＜0.05)。结论 番荔枝内酯对体外人淋巴瘤Raji细胞的增殖有抑制作用,并可能通过线粒体途径促进其凋亡。 【关键词】 番荔枝内酯；抗肿瘤；凋亡；增殖；caspase-9；Raji细胞 Abstract：Objective To investigate the effects of annonaceous acetogenin on proliferation and apoptosis in Raji cells and its mechanism. Methods Raji cells cultured in vitro ycin group. Raji cells L annonaceous acetogenin. Proliferation of Raji cells etry. Caspase-9 protein munohistochemistry. Results The Raji cell proliferation rate of annonaceous acetogenin decreased pared L group ycin group, and it e. The apoptosis rate L group ycin group, and it e. The expression of caspase-9 protein of annonaceous acetogenin group e. Conclusions Annonaceous acetogenin could inhibit cell proliferation in a dose-dependent and time-dependent manner in Raji cells, and it may induce Raji cells apoptosis by up-regulating caspase-9 expression. Key or；apoptosis；proliferation；caspase-9；Raji cell 番荔枝(Annona squamosa Linn.)为番荔枝科番荔枝属植物,我国广东、广西、海南、福建、云南等省及台湾地区均有栽培,东南亚、南美国家及地区也有广泛分布。番荔枝内酯(annonaceous acetogenins)分布在番荔枝科多种植物的根、树皮、种子、叶以及果实中。研究表明番荔枝内酯是一类很有希望的新抗癌药物。笔者研究番荔枝内酯在淋巴瘤治疗中的应用,现将体外实验结果报道如下。 1 实验材料 1.1 药物 番荔枝内酯类化合物：为本研究组参照Dos Santos等1方法从番荔枝种子中提取分离所得,为白色蜡状粉末。使用前以少许无水乙醇溶解,加生理盐水配制成所需浓度,乙醇终浓度不超过1%；盐酸阿霉素为意大利法玛西亚公司产品。 1.2 主要试剂 四甲基偶氮唑蓝(MTT,美国Sigma公司),AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒(南京凯基生物公司),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9 (caspase-9)免疫组化试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)。 1.3 瘤株 人Burkitt’s淋巴瘤细胞系Raji细胞购自华中科技大学同济医学院免疫教研室,并由本院实验室传代保存。 2 实验方法 2.1 分组 番荔枝内酯组：细胞培养基中加入生理盐水溶解的番荔枝内酯,实验终浓度分别为6.25、12.5、25、50 μg/mL；未干预组：细胞培养基中加入与实验组等体积的生理盐水；阿霉素组：细胞培养基中加入生理盐水溶解的阿霉素,终浓度为0.1 μg/mL。 2.2 MTT比色试验 取处于对数生长期的Raji细胞1×105/mL,接种于96孔培养板,分别加入不同浓度番荔枝内酯以及阿霉素各10 μL,孵育24、48、72 h。孵育结束前4 h,各培养孔加入MTT(5 mg/mL)10 μL,离心,弃上清,加入10%二甲基亚砜震荡溶解结晶