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葡萄糖钳夹技术的建立与应用 钳夹技术 高葡萄糖钳夹技术 高胰岛素正葡萄糖钳夹技术 相关背景知识 糖尿病是高度异质性疾病，目前认为主要是由于胰岛素抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷伴或不伴胰岛素抵抗引起。 如何评价胰岛素抵抗？ 高胰岛素正葡萄糖钳夹技术。（可重复性好，最精确。） 微小模型法（MMT）。 各种简易指数。 如何评价B-细胞功能? 葡萄糖刺激的胰岛素分泌： 高葡萄糖钳夹、最小模型法、IVGTT、OGTT 非糖物质刺激： 胰高糖素试验、精氨酸试验、甲苯磺丁脲 B-细胞产生的非胰岛素肽类： C-肽、胰淀素。 高葡萄糖钳夹技术的建立与应用 原理及应用 1 通过输注外源性葡萄糖使血糖浓度较空腹状态迅速升高,并在一定时间内维持相对平稳的高糖状态。在这种持续的高糖状态下，可以观察到胰岛素在糖刺激后的快速分泌相（第一相），以及随后出现的与高糖持续时间一致的第二相分泌，并能测定稳态下机体最大的分泌胰岛素的能力，从而能完整的评估胰岛B细胞的储备和分泌胰岛素的功能。 原理及应用 2 同时由于大部分的内源性葡萄糖生成被抑制，外源性葡萄糖的输注率即被认为是组织葡萄糖的利用率，通过计算可以得到胰岛素敏感性指数，其与评价胰岛素敏感性的“金标准”-----高胰岛素正葡萄糖钳夹的相关性较好。 实验仪器： 1、输液泵一台。 2、快速血糖测定仪一台。 3、温度控制仪一台。 4、多功能计时秒表两个。 实验物品 1、输液管（输液泵专用）。 2、三通管3个。 3、连接管2条。 4、静脉留置针2个。 5、针筒：1ml，5ml，60ml针筒各若干个。 受试者准备 试验前晚8点钟后禁食，可少量饮水，早晨8点到实验室，排空小便后仰卧。 试验前，将试验的性质、目的以及可能产生的不良反应告知受试对象，并填写知情同意书。 受试者应排除肝肾疾病。 试验前三天，受试对象每日至少进食250克以上碳水化学物，维持体重稳定。 主要试剂 1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化钠溶液：0.9%。 高葡萄糖钳夹操作流程 1 1.??配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。 2.?令受试者排空小便后仰卧于床，整个实验过程中保持清醒安静状态。 3.?分别在两侧上肢静脉留置穿刺针，以生理盐水维持通道，以备抽血及输注20%葡萄糖。 高葡萄糖钳夹操作流程 2 4.分别于-30，-15，0分钟留取基础血样后，一侧上肢置于一温度为50°C，湿度为70%的恒温箱中以获得动脉化的静脉血样，另一侧静脉通道用于输注20%葡萄糖。 高葡萄糖钳夹操作流程 3 5. 20%葡萄糖的输注分两个阶段：第一阶段为初始剂量阶段，使血糖在14分钟内升高7.9mmol/L，其具体的输注率按DeFronzo提供的体表面积经验值及实际操作中每2分钟测得的血糖值调节。第二阶段为维持剂量阶段，葡萄糖输注率以实验15-150分钟内每5分钟测得的血糖值根据负反馈原则调节，并记录调节时间。 高葡萄糖钳夹操作流程4 6. 标本采集；于开始输注葡萄糖0-10分钟内每2分钟取血测定胰岛素，以后每10分钟取血一次，测定胰岛素。每30分钟取血一次测定胰高糖素。实验结束后收集实验过程中的尿液，测定尿糖含量。 7.留取部分实验中输注的葡萄糖液测定精确的葡萄糖浓度。 结果处理 1 一） 评价B细胞功能： 1.计算第一时相胰岛素分泌（first-phase insulin release,1PH）： 1PH =∑Ins(2,4,6,8,10 mins). 2.计算第二时相胰岛素分泌（second-phase insulin release,2PH）； 2PH=∑Ins（20-150 mins）/14 3.最大胰岛素分泌量（maximum insulin secretion,INS120-150）: INS120-150=∑Ins（120-150 mins）/4 结果处理 2 二） 评价胰岛素敏感性： 1.葡萄糖输注率（INF，mg/kg/min）:根据输液泵调节情况及个体体重校正实际葡萄糖浓度后计算。 2.空间校正值（SC，mg/kg/min）： 是对实际血糖变化时葡萄糖空间充溢或不足的情况加以校正。 结果处理 3二） 评价胰岛素敏感性 4.尿糖（UC，mg/kg/min）：实验过程中尿糖的排出量。 5.葡萄糖代谢率（M，mg/kg/min）：M=INF-SC-UC 6.胰岛素敏感性指数（SI）：SI=M120-150/I120-150*100 高胰岛素正葡萄糖钳夹技术的建立与应用 一 原理及应用 1 通过持续输注外源性胰岛素