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微生物发酵液中脂肽类生物表面活性剂的测定* 陈涛 杨世忠 牟伯中** （华东理工大学化学系，上海 200237 ） 摘要：提出了一种适用于测定微生物发酵液中脂肽类生物表面活性剂的新方法。该方法基于一个脂 肽分子中一般只含有一个谷氨酸残基或者谷氨酰胺残基，通过测定脂肽中的谷氨酸来定量脂肽。按 -4 -1 该方法实验测定了细菌Bacillus Subtilis 发酵液。结果表明，发酵液中脂肽含量为2.82 ×10 mol·L ， 脂肽样品平均回收率为 94.1 ％，相对偏差为 1.28％。该方法取样量少，结果准确，简便易行。图 3 表4 参29 。 关键词：生物表面活性剂; 脂肽; 氨基酸; 谷氨酸；测定方法 中图分类号：Q939.99; O647.2; TE39 文献标识码： 驱油过程中微生物代谢产生的生物表面活性剂类型和产量的确定是微生物驱油机 [1] 理研究的重要内容。生物表面活性剂主要有糖脂、脂肽和磷脂等5 种的基本类型 。由 于用于采油的微生物主要为细菌，菌种相对地比较单一，其代谢产生的生物表面活性剂 [2] 主要为糖脂和脂肽两大类。对糖脂类生物表面活性剂，可采用“苯酚硫酸法” 来定量； 但是，对于发酵液中脂肽类生物表面活性剂，目前尚缺乏成熟而又简便的定量方法。 [3] 高效液相色谱（HPLC ）可用于准确分析发酵液中脂肽类生物表面活性剂 ，但采 用该方法时，必须首先制备高纯度的脂肽作为标样，一般实验室不易获得满足要求的样 [4] [5] [6] 品。快速液滴塌陷法 、乳化指数法 、液滴形状分析法 等方法已用于确定发酵液中 脂肽的含量，这些方法虽然简便，却不能得到准确的定量结果。也有利用界面张力与表 [7-9] 面活性剂浓度之间的关系来确定发酵液中脂肽类生物表面活性剂的含量 ，但该方法 是经验性的，亦得不到理想的结果。而且，发酵液中其它的具有表面活性的非目标化合 物也会影响分析结果；另外，采用该方法时还要求生物表面活性剂的浓度低于其临界胶 束浓度。 [1] 脂肽是由β－氨基或β－羟基长链脂肪酸与小肽链或小肽环构成一类同类物质 ，其 脂肪链部分的碳原子数一般在 12～19 之间，肽部分的氨基酸残基数在6～13 之间，氨 基酸种类有 20 多种。但是，我们在研究中发现，绝大部分脂肽分子中只含有一个谷氨 酸残基或者谷氨酰胺残基（详见表1），即脂肽中谷氨酸残基或谷胺酰胺残基与脂肽在量 上成1:1 对应关系。根据这个特点，我们提出一种通过谷氨酸来测定发酵液中脂肽类生 物表面活性剂的方法。只要除去含有谷氨酸的肽或蛋白杂质，其他成分的存在不会影响 脂肽的定量分析结果。因此，该方法选择性好，准确度高，而且简便易行。本文以细菌 Bacillus Subtilis 发酵液为例，对发酵液中的脂肽类生物表面活性剂进行了定量测定，得 到了满意的结果。 * 收稿日期： ；修改日期： 基金项目：国家自然科学基金），教育部博士点基金（20030251002 ）和教育部重点项目（03071 ）。 作者简介：陈涛（1973-），男，河南人，华东理工大学化学系硕士研究生，主要从事微生物代谢产物分析方法的研 究。**通讯联系人，牟伯中，（1957-），男，博士，教授，博士生导师，主要从事界面化学和微生物采油方面的研