一年生栽植黄芪中黄芪多糖对人外周血T细胞增殖的影响论文.docVIP

　　一年生栽植黄芪中黄芪多糖对人外周血T细胞增殖的影响论文 张善玉， 施溯筠， 朴惠顺， 金在久 【关键词】 黄芪多糖；,,人参总皂苷；,,淋巴细胞 摘要：目的观察1年生栽植黄芪中黄芪多糖（APS1）及其与人参总皂苷(TG)联用时对人外周T细胞(hPBTCs)的增殖的影响。方法采用MTT比色法检测hPBTCs的增殖。结果APS1在25～100μg/ml范围内，TG在5～20μg/ml范围内均促进hPBTCs的增殖，增殖百分率分别为127.8%～144.6%和113.9%～163.1%，APS1与TG在上述浓度范围内联用时, 增殖百分率为309.5%～529.5%。结论 APS1明显促进体外培养的hPBTCs增殖，APS1与TG联用可能增加免疫功能,并具有一定的协同作用。 关键词：黄芪多糖； 人参总皂苷； 淋巴细胞 Effect of Polysaccharide from the Annual Astragalus on the Proliferation of Human Peripheral T Lymphocytes Abstract：ObjectiveTo study the effects of polysaccharide from the annual Astragalus （APS1 ）and bination an peripheral T lymphocytes (hPBTCs) . MethodsBy MTT colorimetric analysis, the proliferation of hPBTCs oted by both APS1(25~100 μg/ml) and TG. (5~20 μg/ml); the percentage of proliferation ulate proliferation of hPBTCs in vitro and the bination of APS1 and TG can promote immune function. Key phocyte 黄芪多糖(APS)为黄芪的主要有效成分.freelembraneaceus Fisch.)；人参总皂苷(吉林省宏久生物技术有限公司)；四甲基偶氮唑盐（MTT）（华美生物工程公司北京分公司）；植物血凝素（PHA）（广州市医药工业研究所）；环磷酰胺（CY）（江苏恒端医药股份有限公司）；二甲基亚砜（DMSO) 等其他试剂均为分析纯。 2 方法 2.1 APS1提取 称取干燥粉碎的1年生载植黄芪药材300 g，加水（20，10，10倍），80℃温度条件下提取3次（2，1，1 h），过滤，滤液浓缩至约500 ml,加95％乙醇至醇度达80％，放置过夜，沉淀加水溶解，过滤，经Sevag法［3］除蛋白7次，用氨水调pH至8，加3％过氧化氢后放置37℃水浴12 h,过滤，滤液置透析袋中流水透析12 h,液体浓缩再醇沉，放置过夜，沉淀用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥，得7.2 g类白色粉末状粗多糖（多糖含量为 78.3％）。 2.2 对人外周T细胞增殖反应（MTT法）［4］ 2.2.1 实验分组实验共设10个组，①APS1 1组：APS1 25 μg/ml；②APS1 2组：APS1 50 μg/ml；③APS1 3组：APS1 100 μg/ml；④TG 1组：TG 5μg/ml；⑤TG 2组：TG 10μg/ml；⑥TG 3组：APS1 20μg/ml；⑦联用1组：APS1 25 μg/ml + TG 5μg/ml；⑧联用2组：APS1 50 μg/ml + TG 10μg/ml；⑨联用3组：APS1 100 μg/ml + TG 20μg/ml；⑩对照组：生理盐水。 2.2.2 T细胞增殖反应取正常人抗凝外周血30 ml，按常规分离淋巴细胞，用完全培养液调整细胞的密度为1×106/ml，台盼蓝染色检测细胞存活率 95％。取100 μl加入96孔细胞培养板中，加入终浓度为10 μg/ml的PHA，并按实验分组加入ASP1，TG溶液或生理盐水（同时每组分别以培养液代替细胞液作为空白对照），每组设3个复孔，置37℃,.freelin，用酶标仪于波长490 nm处测定吸光度值，结果以4个复孔的平均吸光度值A490 nm（实验组A490 nm = A490 nm加供试品组－A490 nm空白对照）和细胞增殖百分率表示（细胞增殖百分率＝实验组A490 nm/对照组A490 nm×100％）。 2.3 统计分析实验数据以 ±s表示，用两样本均数比较t检验进行统计学处理。 3 结果 用MTT法测定结果，正常人外周T细胞在PHA激活的条件下，APS1，TG和APS1＋TG各浓度组的淋巴细胞光密度值A490