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矮牵牛PMADS9基因的启动子克隆与功能分析论文
目 录
摘 要………………………………………………………………………………………………………………………………I
ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………………………·IIl
第1章文献综述 l
1．1 植物花器官发育的模型……………………………………………………………………l
1．1．1植物花发育经典ABC模型………………………………………………………………l
1．1．2． ABC模型的发展………………………………………………………………………l
1．2．1．MADS．box基因…………………………………………………………………………………………………·2
1．2．2．AG亚家族基因……………………………………………………………………………3
1．3．植物启动子研究进展…………………………………………………………………………．4
1．3．1．启动子的结构特征………………………………………………………………………。4
1．3．2．启动子类型及特点………………………………………………………………………6
1．3．3．植物基因启动子克隆方法………………………………………………………………”7
1．3．4．启动子研究方法………………………………………………………………………·12
第2章引 言 15
第3章 实验材料与方禹}………————¨—¨·¨·一¨—一．17
3．1实验材料……………………………………………………………………………………．17
3．1．1植物材料………………………………………………………………………………一17
3．1．2菌株和载体……………………………………………………………………………．．17
3．1．3主要试剂………………………………………………………………………………“17
3．1．4主要设备………………………………………………………………………………“l8
3．1．5常用试剂配制…………………………………………………………………………一l8
3．1．6基本培养基配…………………………………………………………………………一19
3．2实验方法……………………………………………………………………………………·20
3．2．2
3．2．3对拼接获得的PMADS9基因上游启动子序列进行全长克隆…………………………．25
3．2．4对启动子序列进行生物信息学分析……………………………………………………·25
3．2．5启动子5’端缺失表达载体构建…………………………………………………………26
3．2．6农杆菌介导转化矮牵牛…………………………………………………………………28
3．2．7阳性转基因再生植株鉴定………………………………………………………………30
3．2．8阳性转基因再生植株各组织GUS活性检测……………………………………………30
第4章实验结果与分析 31
4．1矮牵牛PMADS9基因启动子序列克隆……………………………………………………”31
4．1．1矮牵牛基因组DNA提取和纯化………………………………………………………．3l
4．1．2
hiTAIL．PCR法扩增得到更长启动子序列………………………………………………．31
4．1．3全长启动子序列克隆……………………………………………………………………33
…………………………………………………··34
…………………………………………………··34
………………………………………“…………36
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