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（五）包埋 1.石蜡包埋法—常用的方法 浸蜡 软蜡I 软蜡II 硬蜡 54-56℃ 56-58℃ 2.快速石蜡包埋法—用于快速诊断 包埋过程 包埋注意事项 3.火棉胶包埋法—用于大块组织和眼球 4.碳蜡包埋法、明胶包埋法—不常用 三、组织制片法-切片 （一）石蜡切片法 1.切片前的准备工作 载波片的处理； 防脱片剂的选择； 修块； 备刀 2.切片过程 3.石蜡切片常遇到的问题及解决的方法 4.切片注意事项 （二）冰冻切片法 1.制备石蜡切片的基本步骤。 2.组织取材和固定的注意事项。 思考 四、染 色 将染料配成溶液，将组织切片浸入染色剂中，使组织、细胞等成分被染上深浅不同的颜色，产生不同的折光率，便于在光镜下观察。 1.目的 2.染料特性 染料是有机化合物，在其分子结构中有特殊功能的基团，发色团和助色团。 3.染色原理 尚不完全清楚。 化学反应； 物理作用：吸附作用、吸收作用 4.常规染色技术—HE染色 苏木精（Hematoxylin）为碱性染料，能将细胞核染成蓝色 ； 伊红（Eosin）为酸性染料，常将细胞质染成红色 HE染色的步骤和方法 蓝化 充分水洗 分色 伊红染色 水洗 脱蜡 苏木精染色 水洗 复水 水洗 脱水 透明 封片 脱蜡： 二甲苯I、II，脱蜡必须彻底； 复水：梯度酒精，洗去溶解的石蜡和二甲苯； 水洗：普通水洗，蒸馏水洗； 苏木精染色：染色时间10-15min； 水洗：普通水洗净染液； 分色：盐酸酒精分色，将过染或不需 要染色的组织成分除去； 水洗：普通水洗净染液； 氨水蓝化：使细胞核进一步变蓝； 充分水洗：洗去盐酸酒精，终止其褪色作用； 伊红染色：染细胞质，时间勿长； 脱水：梯度酒精，一定要彻底； 透明：二甲苯I、II，确保切片完全透明； 封片：中性树胶 HE染色注意事项 脱蜡必须彻底； 梯度酒精复水； 苏木精染色时间依染液新旧、 切片厚薄、温度灵活掌握； 分色是染色成败的关键； 分色后水洗要充分； 伊红染色要适中； 封片前脱水要彻底 小 结 制备石蜡切片的基本步骤。 组织取材和固定的注意事项。 HE染色的操作步骤和注意事项。 组织学技术 ——概述、切片制备 付文玉 fuwenyu.2007@163.com 2008.9.10 概 述 光镜技术 石蜡切片术 （paraffin sectioning） 苏木精-伊红染色,简称HE染色 （hematoxylin-eosin staining） HE染色，脑垂体 扫描电镜术（scanning electron microscopy,SEM）： 观察组织细胞表面结构 电镜技术 透射电镜术（transmission electron microscopy,TEM）： 观察细胞内部结构 Transmission Electron Microscope 浆细胞 血细胞 组织化学技术 一般组织化学 （Classical histochemistry） 免疫组织化学 （immunohistochemistry） 原位杂交 （in situ hybridization) 兔肝PAS反应 图像分析术-形态计量术 应用数学或统计学原理对组织切片提供的平面图像进行分析，从而获得立体的组织和细胞内各种有形成分的数量、体积、表面积等参数，从量的角度显示结构和功能的关系。 细胞培养术和组织工程 细胞培养术：把从机体取得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养的技术。 组织工程：细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技术。 实验中的组织工程耳 石蜡切片的制备 基本操作步骤 取材、固定 洗涤、脱水 透 明 浸蜡、包埋 切 片 染 色 脱水、透明、封片 一、取材、固定 1.动物致死法 麻醉 空气栓塞 颈椎脱臼或断头 股动脉放血 （一）取材 2.动物选择 根据教学或科研目的和要求确定。 3.取材方法 取材顺序 先腹腔，后胸腔、盆腔，最后取神经系统 肌组织：纵切后结扎固定，以防因收缩而出现波浪形变化。取纵、横切面； 肝脏：右前叶或左外叶中部。纵切或冠状切面； 胆囊：取胆囊体部，附于滤纸，洗去胆汁后固定； 组织、器官取材举例 胰腺：取含有较多胰岛的胰尾部。 胃：取胃底或胃体。附于滤纸，防止卷缩； 肾脏：纵剖，再做扇形切面，皮、髓质均有。 4.外科活体组织取材 临床手术取材：多用于肿瘤组织。包括肿瘤及其周围组织； 活体小组织：包埋时注意切片的面，因体积较小，仔细操作 5.取材注意事项 动作轻、快，保证组织新鲜; 保持组织清洁; 力求组织块小而薄; 一刀切取，避免挤压; 尽量保持组织原有形状; 部位准确，切面合