ch02动物细胞大培养技术.pptVIP

“细胞静止”过程可以有效降低营养成分消耗和代谢毒物产生，提高CHO细胞的目的蛋白产率。 p21、p27基因，使细胞周期中G1期延长(细胞静止)。 向CHO细胞中导入p21、p27基因，细胞活力正常，外源基因表达蛋白量提高。 （三）培养基 在经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基成为当今细胞培养领域研究的一大课题。 优化无血清培养基的成分，可使不同的细胞在最有利于细胞生长和表达目的产物的环境中维持高密度培养。 无血清培养基并不适用于广泛的细胞类型，不同类型的细胞甚至不同的细胞系或细胞株都有可能有各自的无血清培养基构成。 （四）细胞系 通过细胞工程方法使细胞高水平表达外源基因并正确加工表达产物，从而提高整个表达系统的产率，也成为应用大规模动物细胞培养生产外源目的蛋白的研究的重要手段。 控制细胞中的分子伴侣能够使细胞正确折叠、组装、定位、分泌新合成的重组蛋白从而提高产量 控制外源基因表达的启动子的特性是基因表达的基础之一 （五）过程监控 大规模动物细胞培养中由于大量细胞的代谢，细胞培养环境迅速改变，对细胞培养进行在线过程监控十分的重要。 温度、pH值、溶解氧浓度 四、动物细胞大规模培养的生物反应器 1.生物反应器设计依据 ?? 除了以人工诱变为目的的培养外，用于动物细胞培养的生物反应器的设计原则应该是尽量模拟培养物在生物体内的生长环境。 由于动物细胞生长的特殊性，如贴壁、脆弱等，与微生物细胞培养不同，需要特别注意反应器结构设计以及特殊载体的选择。 * Section 3 动物细胞大规模培养 通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞，是生产生物制品的有效方法。 一、动物细胞大规模培养概述 1.定义 动物细胞大规模培养技术（large-scale culture technology）是指在人工条件下（设定ph、温度、溶氧等），在细胞生物反应器（bioreactor）中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。 动物细胞大规模培养有何现实意义？ 2.意义 动物细胞培养生产的生物制品 （1）病毒疫苗：乙肝疫苗(HbsAg)、脊椎灰质炎疫苗(Polio)、狂犬疫苗(Rabies)等。 （2）非抗体免疫调节剂：干扰素（IFN ）、白细胞介素（IL ）、B 细胞生长因子（BCGF ）、巨噬细胞激活因子（MAN）、T 细胞替代因子（TRF）等等。 （3）多肽生长因子：神经生长因子（NGF ）、成纤维细胞生长因子（ FGF）、表皮生长因子 （EGF）、血清生长因子（SF）等。 （4）酶类：组织血纤维溶酶原激活剂（t－PA ）等 （5）激素：红细胞生成素（EPO）、促黄体生成素（LH）、促滤胞素（FSH）等 （6）肿瘤特异性抗原：癌胚抗原（CEA）等 （7）单克隆抗体（ MCAB ） （8）病毒杀虫剂：杆状病毒等 （9）皮肤移植：单细胞培养等 为什么较少使用微生物细胞培养的方法生产药用蛋白？ 二、 动物细胞大规模培养的方法 悬浮培养 微囊化培养 中空纤维法培养 微载体培养 多孔载体培养 （一）悬浮培养技术 ?? 少数动物细胞属于悬浮生长型，它们在离体培养时不需附着物，只需悬浮于培养液中就可以良好生长。 方法：将采集到的活体动物组织分散、过滤、离心、纯化、漂洗后接种到有适宜培养液中。置于特定培养条件下培养。传代时不需要再分散，只需按比例稀释后即可继续培养。 特点：这种方法细胞增殖快、产量高、培养过程简单，是动物细胞大规模培养的理想模式。不过，只要极少数种类的细胞适合这种悬浮培养。 细胞悬浮 液的制备 （二）微囊化技术－固定化 ?? 微囊是一种用人造的半透膜制成的多孔微球体，小分子物质可以自由透过，而各种酶、辅酶、 离子交换剂、活性炭及蛋白等大分子物质可包 裹在其中不能逸出。 方法：微囊化培养是借鉴此种固定化技术将细胞包裹在微囊中，在培养液中悬浮培养。 特点：细胞生长在各自的微小环境里受到一定的保护，减少了搅拌对细胞产生的剪切力。 用途：微囊化培养对单克隆抗体、干扰素等有用产品的大规模生产提供了一种有效途径。 A 悬浮细胞胶状液 B 成液器 C 凝胶小珠 D 包被溶液 E 多孔微囊膜 F 微囊 G微囊示意图 （三）中空纤维法 ?? 最初使用的空心纤维是一种由醋酸纤维素和硝酸纤维素混合组成的可透性膜，表面有许多海绵状多孔结构，这样，水分子、营养物质和气体可以透过，细胞也能在上面贴附生长。 方法：就是模拟细胞在体内生长的三维状态，利用人工的“毛细血管”——中空纤维来供给细胞生长的营养等条件。培养系统的核心部