真菌拮抗细菌筛选方法的改进.pdfVIP

实验技术 SHIYANJISHU 真 菌 拮 抗 细 菌 筛 选 方 法 的 改 进 * 魏冬梅，阿力木江·阿布都拉，申 慧，王咏星* （新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046 ） 摘要：通过对传统真菌的拮抗细菌的对峙培养筛选方法 1.2 实验方法 进行研究改进，克服在传统拮抗菌的筛选过程中所面临的一 1.2.1 培养皿准备 些问题，结合载玻片培养的载玻片筛选法，使真菌与细菌的 在直径为9 cm 的培养皿中铺上与其直径相当 作用距离更小，拮抗作用的观察更为直观，并易于量化设计， 的滤纸片，放上三角棒和载玻片，然后经 5 1 × 10 Pa 此法提高了真菌拮抗菌筛选的效率和准确率。 灭菌 20 min 后向培养皿中加入 3 ~ 5 mL 20% 的无 关键词：真菌；拮抗细菌；筛选；载玻片培养法 菌甘油溶液。 拮抗菌的筛选，在开发利用微生物的生物防治 1.2.2 培养基准备 向无菌培养皿中倒入15 mL 冷却至50 ~ 60 ℃ 作用中是最基础的，因此提高筛选效率和准确性十 分重要。 在筛选真菌的拮抗菌过程中，普遍采用对 的脑心浸出培养基， 并让其凝固后用解剖刀在培养 峙培养法[1] ，观察平板培养基中细菌和真菌对峙培 基中割取 1 cm × 1 cm 的琼脂块，并将其挑出放于培 养时，是按真菌菌落的大小来判断细菌拮抗性的有 养皿中的载玻片中央。 无。 该方法有操作方便的优点，但无法避免一些实 1.2.3 菌种制备 际问题。 如对峙培养法筛选拮抗菌时不能有效的控 细菌经分离后保存，并以此为菌种进行筛选。水 制待选菌的生长量，因此无法判断其是营养竞争抑 霉孢子液的制备方法参照张书俊等[2] ，然后经进一步 制还是其代谢的物质产生拮抗作用；在接种真菌时 3 000 r/min 离心处理5 min 后取其上清液。 1.2.４ 接种 一般是用打孔器取长有真菌的培养基接种，这样真 菌在平板上的菌龄不一样，即有的是菌落的中心部 分，菌龄大，边缘部分菌龄小，他们有不同的生活 力， 因此在对峙培养中可能会出现假阳性现象；在 对峙培养时平板的厚度和真菌菌种琼脂块与培养 基的接触情况也将影响真菌菌落的生长情况；在筛 选过程中我们很难在显微水平上观察到其拮抗效 果。 针对以上不足，我们设计了一种新的实验方法 接种俯视图 进行真菌的拮抗细菌筛选——— 载玻片筛选法。 1 材料与方法 1.1 实验材料 脑心浸出培养基、水霉菌（Sa prolegnia. Spp ）、从 河鲈肌肉和粘液中分离得到的细菌。 收稿日期： — — 2016 12 29 接种剖面图 *基金项目：鱼类水霉病病原生物接抗菌的筛选及其拮抗机 图 培养及接种方法 1 理分析