徐淮山羊Sox2基因启动子的克隆及其活性的初步分析.pdfVIP

2014 茸第50 卷革7 期 Genetics and Breedìng .遗握自甜 徐淮山羊Sox2基因启动子的克隆及 其活性的初步分析 韦光辉l ，未 睿1 ，刘志永l ，邱峰龙1 ，张振韬1 ，陈庭锋l ，张亚妮1 ，李碧春\曹文广2 (1.扬州大学动物科学与技术学院，江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，江苏扬州 225009; 2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 1∞193 ) 摘 要:本研究旨在确定徐淮山羊Sox2 基因启动子区域，找出该基因启动子的核心调控区，初步探讨Sox2 基因 的表达调控机制。根据GenBank 已公布的绵羊Sox2基因的启动子序列 设计特异性PCR~1 物扩增Sox2基囚的一 系列启动子缺失片段，经酶切、溃1J 序及生物信息学分析，构建包含Sox2基因5 侧翼区一系列启动子缺失片段的 pGL3 -Sox2 双荧光素酶表达载体，转染COS-7和GCl 细胞，并进行5 -aza- 2 -deoxycytidine诱导，检测不同片段的 启动子活性。结果表明:徐淮山羊Sox2基因5 侧翼区-1249一+49 bp 区域的启动子活性最强(COS-7细胞) , -1792 +49 bp 区域活性最强(GCl 细胞) ， -224一+49 bp 区域为Sox2 基因启动子基本活性区域。进一步研究发现，-484一 -109 bp 区域存在正调控元件，-755一-484 bp 区域存在负调控元件。本实验通过构建包含Sox2基因启动子不同 片段的重纽报告基因载体并比较其转录活性，确定了 Sox2 基因启动子的核心区域。另外，5-aza-2­ deoxycytidine 可以显著增强Sox2启动子的活性。为进一步研究Sox2基因的表达调控机制奠定了基础。 关键词 :Sox2基因;启动子;活性分析;5 - aza- 2 -deoxycytidine诱导;山羊 中图分类号 :S827.2 文献标识码 :A 文章编号:0258-7033(2014)07-仪泊5-06 SOX 基因家族是→类SRY (sex determination 沟的结合来调控发育的各个过程，在中枢神经系统 region of Y Chromosome) 相关基因构成的基因家族， 发育的早期，其表达于全部的神经上皮，但之后，其 编码一系列SOX (SRY -related HMG -box) 家族的转 表达局限于胚基的神经胶质干细胞，同时Sox2具有 维持干细胞不断增殖、抑制其定向分化的作用 [45l ， 录因子，其产物都具有-个HMG基序保守区。目前 共发现20种sox家族基因[叮。 sox基因家族对机体不 Sox2的正常表达对于细胞特性的维持至关重要。 同胚层的发育形成过程、组织器官的发育和细胞命 启动子区域是基因转录水平最为基本的一种调 节结构[6-7J 。本研究以徐淮山羊为实验动物，通过对 运类型起到一定的调节作用l习。 Sox2属于SOX家族的 B组，是该家族中关键的一员，含有1 个外显子，在脊 Sox2基因启动子的克隆、生物信息学分析、缺失片段 椎动物中其基因序列相对保守I 匀 ， Sox2通过与DNA小 的构建、细胞的瞬时转染、缺失片段活性的检测，找 到Sox2基因启动子的核心调控区域，为进一步研究 收稿日期:2013-08-29; 修回日期 :2013-10-11