小鼠抗HCMV-gB多克隆抗体的制备及初步应用.pdfVIP

动物医学进展，2012 ， 33(2):51-54 Progress in Veterinary Medicine 小鼠抗 HCMV-gB 多克隆抗体的制备及初步应用 韩慧平，于三科· (西北农林科技大学动物医学院，陕两杨凌 712100) 摘 要:为了快速制备抗 HCMV-gB 小鼠多克隆抗体，通过 PCR 扩增 HCMV-gB (57 aa -146 aa) 编码 序列并克隆到原核表达载体 pET21b (+)多克隆位点，用重组质粒转化大肠埃希菌 Rosetta (DE3) 并通过 IPTG 诱导表达，经镶胶亲和层析纯化和透析复性获得重组蛋白。以 CpG-ODN 和 Al(OH)3 复合佐剂作为 重组蛋白的免疫佐剂，通过 0 周和 3 周 2 次肌肉注射免疫 Balb/c 小鼠，并在第 5 周采血分离免疫血清。用 ELISA 检测免疫血清效价，并通过 Western blot 检测免疫血清对哺乳动物细胞表达的 HCMV-gBl 和 gB2 的反应性。结果显示，本研究制备的免疫血清 ELISA 滴度达到 1 : 51 200-1 : 102 400 ，进行 Western blot 能够与哺乳动物细胞表达的 HCMV-gBl 和 gB2 发生特异性反应。此试验获得了能够用于后续研究工作的 抗 HCMV-gB 小鼠多克隆抗体，本方法具有制备速度快、抗体滴度高和抗原用量少等优点。 关键词 :CpG-ODN;Al(OH)3; 免疫佐剂;多克隆抗体 中图分类号:S852. 659. 5;S858. 21 文献标tR码:A 文章编号:1007-5038(2012)02-0051-04 巨细胞病毒(Cytomegalovirus ， CMV)感染在 MV 表面的包膜糖蛋白 B( glycoprotein B. gB) 全长 人及动物中普遍存在，不同的物种具有其特定的病 906 个氨基酸，介导病毒与宿主细胞的勤附和融合， 毒株，我国人巨细胞病毒(H uman cytomegalovirus. 是 HCMV 自然感染中诱生中和抗体的主要保护性 HCMV)感染率高达 86%-96%[1]0 HCMV 感染 抗原，因此也是 HCMV 疫苗研究的主要靶抗原凶。 对胎儿和免疫功能低下者危害严重[叫，而且与动脉 本实验室在前期研究基础上构建了两个含有 gB 中 粥样硬化和肿瘤发生密切相关[付。研制 HCMV 疫 和表位区域的重组蛋白 gBl 和 gB2 ，以作为 HCMV 苗对预防该病毒感染具有非常重要的意义阳。 HC- 疫苗的候选抗原。为了对这两个候选疫苗抗原进行 收稿日期:2011-09-07 作者简介:韩慧乎0985一) .女，河南长垣人，硕士研究生，主要从事动物疫病防控研究。铃通讯作者 来快来警崇脊来9船来9能来任来*来4悟到陆警****来缭来解*泰来绿脊骨来帮眷脊崇穆来***崇9倍崇修缮*带*******崇4华来鲁带梅来锵端能**眷曾崇怪来***崇来来警**来警来曾来拳来*牵奈来将来猪来* Anti- Toxoplasma Test of Extracts of Three Traditional Chinese Medicine and Inonotus obliquus in Vitro WANG Yun-chi. 1U Yu-lin. YAO Lin (Agricultural College 0/ Yanhian University. Y