食道癌患者CD4+、CD25+、Foxp3+调节性T细胞的变化及意义.docVIP

　　食道癌患者CD4+、CD25+、Foxp3+调节性T细胞的变化及意义 作者：胡正军 王胜军 李媛 成军 孙长贵 钱丽丽 刘永林 陈益民 【摘要】 ［目的］初步探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T 细胞在食道癌患者外周血中的变化及临床意义。［方法］59例食道癌患者，分为鳞癌组47例，腺癌组12例，另外30例健康志愿者为对照组，用流式细胞术分别检测外周血中CD4+、CD25+、Foxp3+T 细胞占CD4+T细胞的比例。［结果］食道癌初诊患者组CD4+、CD25+、Foxp3+T 细胞比例为(10.33±5.72) %，明显高于健康志愿者组(4.56±1.06) % (Plt;0.01)，而食道鳞癌组和食道腺癌组CD4+、CD25+、Foxp3+T 细胞比例没有明显差异。［结论］CD4+、CD25+、Foxp3+调节性T 细胞在食道癌初诊患者外周血中比例增加,可能是食道癌免疫抑制的一个重要原因。 【关键词】 食道癌；CD4+CD25+调节性T 细胞；叉状头/翅膀状螺旋转录因子 　　Abstract：［Objective］ To investigate the changes of CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells (Tregs) in peripheral blood of patients a and its possible clinical significance.［Methods］ The floetry a before therapy and of the healthy donors.［Results］ The percentage of CD4+,CD25+,Foxp3+T cells of the esophageal carcinoma group before therapy a is significantly increased,suggesting that it might be one of the important reasons of immunosuppression in esophageal carcinoma. 　　Key a;CD4+,CD25+regulatory T cells;forkhead/ l,EDTA 抗凝。用人淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC),每管加100μl 上述PBMC(约1×106个细胞),应用荧光直接标记法及流式细胞仪检测PBMC膜表面CD4、CD25及胞质Foxp3。取20μl不同荧光标记的CD4/ CD25单克隆抗体混合液,4℃避光孵育30 min,用预冷的PBS洗涤后悬浮细胞,每管加1 ml新鲜制备的固定/透化剂,4℃避光孵育45 min,离心弃上清加预冷的PBS洗涤,用2 ml透化缓冲液洗涤细胞两次,用2μl (2 %)正常小鼠血清封闭15 min后加20μl Foxp3抗体,4℃避光孵育30 min,用2 ml透化缓冲液洗涤细胞2次,加入适当体积FCM染色缓冲液悬浮细胞,流式细胞仪检测,以CD4+T细胞设门，EXPO32软件分析数据,记录阳性细胞百分率,减去非特异对照值。 　　1.4 统计学分析 采用SPSS 12.0 软件进行分析,应用单因素方差分析及t检验方法比较各组间差异,数据用(x±s) 表示,Plt;0.05为差异有显著意义。 　 　2 结果 　　食道癌初诊组CD4+CD25+Foxp3+T 细胞占CD4+T细胞群体比例(10.33±5.72) %明显高于健康志愿者组(4.56±1.06) % (Plt;0.01)。47例食道鳞癌组CD4+CD25+Foxp3+T 细胞占CD4+T细胞群体比例(10.28±5.22)与12例食道腺癌组(10.50±5.85)相比无明显差异（Pgt;0.05），但都明显高于健康志愿者组(4.56±1.06) % (Plt;0.01)，见表1。 　　3 讨论 　　CD4+CD25+Tregs 是近年来发现的一种新型的免疫抑制细胞,来源于胸腺,外周血中持续性抗原刺激及IL10、TGFβ等细胞因子条件下诱导也可产生［46］。近年来许多学者对CD4+CD25+Tregs在肿瘤免疫方面大量的研究证实,肺癌、卵巢癌、胃肠道肿瘤、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病等患者外周血或肿瘤局部CD4+CD25+Tregs 成分增加,提示肿瘤患者可能存在天然的免疫反应,并具有促进机体免疫抑制的作用。 　　Foxp3 是CD4+CD25+Tregs 特异性标志,与其生长发育和功能维持密切相关。本研究结果表明，食道癌初诊组CD4+CD25+Foxp3+T 细胞占CD4+T 细胞群体比例(10.33±5.72) %明显高于健康志愿者组(4.56