小鼠脑脊髓炎病毒 RT-PCR 方法的建立及初步应用.pdfVIP

２０１５ 年 １０ 月 中国比较医学杂志 ， ２０１５ Ｏｃｔｏｂｅｒ 第 ２５ 卷　第 １０ 期 ．２５　 ．１０ ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ Ｖｏｌ Ｎｏ 研究报告 小 鼠 脑 脊 髓 炎 病 毒 - 方 法 的 建 立 及 初 步 应 用 ＲＴ ＰＣＲ 李晓波，付　瑞，王　吉，卫　礼，王淑菁，岳秉飞，贺争鸣 （中国食品药品检定研究院 实验动物资源研究所，北京　１０００５０） 　　【摘要】　目的　建立小鼠脑脊髓炎病毒 - 方法并对方法进行初步应用。 方法 　根据 发表的 ＲＴ ＰＣＲ ＮＣＢＩ 株（ ：６２０３９）基因组序列设计特异引物，建立 - 方法，验证方法的敏感性和特异性；脑腔接种 ＴＭＥＶ ＧＤ ＶＩＩ ＧＩ ＲＴ ＰＣＲ 方式感染 ９ 只 ／小鼠，感染后第 ６ 天采集动物的脑、心、肝、脾、肺、肾、盲肠内容物和血清等样本，用建立的方 ＢＡＬＢ ｃ 法进行检测；同时检测 １００ 份小鼠盲肠内容物样本，对方法进行初步应用。 结果 　以 为模板，建立的 ＧＤ ＶＩＩ ＲＮＡ - 方法能够扩增出约 ３７１ 的单一目的条带，敏感性验证显示能够检测到的最低 量为 ０畅６９ ／ ＲＴ ＰＣＲ ｂｐ ＧＤ ＶＩＩ ｃＤＮＡ ｐｇ μ ；以脑心肌炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、日本乙型脑炎病毒、小鼠诺如病毒及正常小鼠脑组织为对照进 Ｌ 行方法特异性验证，均未出现目的条带。 脑腔接种感染小鼠，所有小鼠在接种第 ３ 天均产生不同程度的精神萎靡 后肢麻痹等症状，其中 ２ 只小鼠于第 ５ 天死亡；采集心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠内容物及血清等样本进行检测，所有 小鼠的脑组织均检测到