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伯豪医药“乙肝病毒耐药基因突变检测试剂盒”性能评价检测报告 上海伯豪医药科技有限公司 2015年1月15日 伯豪医药“乙肝病毒耐药基因突变检测试剂盒”性能评价检测报告试验 1、 线性范围 2、 最低检出量 3、 分析特异性 4、 精密度测试 5、 检测百分率 6、 内源物质干扰试验 7、 外源物质干扰试验 一测定范围 1、测试方法 待检测标本，是由HBV临床样品制备而成。标本核酸纯化后用HBV－PCR定量试剂盒标定为　5.3*108依次向下梯度稀释至1*107，1*106，1*105，1*104，1*103，1*102，用乙肝耐药基因检测试剂盒进行检测，每个梯度重复3次，在同一台3500上进行检测，考查本方案的线性范围。 2、实验结果 试剂盒检测电泳图 5.3*108阳性标本结果图 1*107阳性标本结果图 1*104阳性标本结果图 1*103阳性标本结果图 结论：本方案线性范围是1*103至5.3*108 二、最低检测量 1、测定方法 待检测标本，是由HBV临床样品制备而成。标本核酸纯化后用HBV－PCR定量试剂盒标定为　2.3*103依次向下梯度稀释至2*103，1*103，500用乙肝耐药基因检测试剂盒进行检测，每个梯度重复5次，在同一台3500上进行检测，考查本方案的最低检测量。 2、实验结果 试剂盒检测电泳图 2.3*103阳性标本结果图 1*103阳性标本结果图 结论：本方案最低检测量是1000 三、分析特异性 1、测定方法 特异性检测标本：选用丙型肝炎病毒（HCV），HIV，HEV，HDV，EBV，HCMV，TP，HSV2，HSV1，作为待检测标本，每种样品重复3次 2、实验结果 试剂盒检测电泳图 结论：本方案特异性100% 四、精密度测试 1、测定方法 待检测标本，是由HBV临床样品制备而成。标本核酸纯化后用HBV－PCR定量试剂盒标定为　5.2*104，用乙肝耐药基因检测试剂盒进行检测，重复10次，在同一台3500上进行检测，考查本方案的精密度。 2、实验结果 试剂盒检测电泳图 精密度测试结果 测得CV值为1.81% 结论：本方案重复性好，CV小于10%。 五、检测百分率 1、测定方法 将相同浓度的突变型样本，（YIDD，YVDD）及野生型样本（YMDD）按照0%，20%，50%，100%，分别采用本方案进行检测，每个样本重复检验5次。 2、实验结果 YIDD 100%突变检测结果电泳图 YIDD 100%突变检测结果 YIDD 50%突变检测结果 YIDD 20%突变检测结果 YVDD 100%突变检测结果电泳图 YVDD 100%突变检测结果 YVDD 50%突变检测结果 YVDD 20%突变检测结果 结论： 在检测百分率测试中，本试剂对与含有20%YIDD和YVDD样本均能检测得出相对应突变，本方案检测百分率可达到20% 六、内源性物质干扰试验 1、测定方法 由于血浆样品中的蛋白，金属离子等干扰物基本在样品处理过程中被除去。故分享彻底的样本不影响检测。为考察血浆样品中可能存在的内源性物质对检测结果的影响，选取含高浓度的胆红素，甘油三酯，血红蛋白和白蛋白的临床血浆样品，在以上四份血浆样品中分别加入HBV样品，至终浓度为1000IU/ml。在正常血液中加HBV样品至同样浓度，重复检测2 次。 2实验结果 内源性物质检测结果电泳图。 胆红素检测结果 甘油三酯检测结果 血红蛋白检测结果 白蛋白检测结果 正常样品检测结果 结论： 实验结果表明，常见内源性干扰物质对本方案1000IU/ml浓度的检测结果无影响。 七、外源性物质干扰实验 1、测定方法 由于核苷类药物常被用于HBV治疗，因此病人血清中存在以上药物可能性较大，分别在1000IU/ml的样品中加入拉米夫定，阿得福韦，恩替卡韦，替比夫定等，用本方案检测，做两个重复。 2、结果 电泳结果 拉米夫定结果 阿得夫韦结果 恩替卡韦结果 替比夫定结果 结论：以上药物对本方案结果无影响 总结： 本方案严格按试剂研发过程，对各项方案涉及性能进行检测，各项指标均满足临床需要，可以胜任申报工作。