葡萄酒中酵母的检测研究微生物课程设计.docVIP

微生物课程设计 题 目: 葡萄酒中酵母的检测研究 姓 名： 学 号： 指导老师： 专 业：生物技术 二零一年月 　℃，培养时间3-5天。葡萄酒暴露在空气时，预测酵母菌数量在酒液中不断增长，过20天后逐渐衰落，其他菌落取代酵母菌成为优势菌落。本论文采用了葡萄酒微生物检验的几种方法，对酵母菌的检测进行了研究，为酵母引起的葡萄酒变质的防治提供一些理论依据。 关键词：葡萄酒；酵母；测定 目录 摘要 I 前言 1 1. 材料与方法 1 1.1仪器和设备 1 1.2材料 1 1.3.1培养基的筛选 1 1.3.2活菌计数法 1 1.3.3混浊度计数 1 1.3.4血球计数法 2 2. 预测结果与分析 2 2.1培养基的筛选 2 2.2 活菌计数法 2 2.3 血球计数法 3 3. 预测结果与讨论 3 参考文献： 4  前言 葡萄酒中存在的微生物主要有霉菌，酵母菌，醋酸菌，乳酸菌它们可能引起葡萄酒变质[1]。酵母菌广泛分布于自然界中，长期以来，人们利用一些酵母加工一些食品但在某些情况下，研究表明，非酿酒酵母的生长有助于酒风味的形成，特别是甘油、酯类和高级醇等物质的产生对酒风味的形成具有积极的作用℃，培养3d～5d并计数[7]。 1.3.2活菌计数法 操作方法：用微量加样器将0.01ml经适当稀释的样品均 匀涂而于载玻片上的1cm2面积的方格内，经干燥，固定后用显微镜的油镜观察计数每个视野的菌数。注意操作时涂片要厚薄均匀，最好洗用特制圆形划痕的载玻上。在计数前先用物镜测微尺测出微镜油镜视野的直径，然后将染色的载玻片置于载物台上进行计数[8]。 本试验中取酒样，用涂布法接种于YEPD培养基和孟加拉红培养基上，培养3d～5d，并菌落计数。 1.3.3混浊度计数 基本原理：在浊度计或比色计上测定培养液中微生物的生长数量。某一波长的光线通过混浊的液体后，光的强度被减弱。入身光与诱射光的强度之比和样品液的混浊度与液体厚度相关[9]。 本试验中采用分光光度法，波长520入 测出各酒样的透光度（T），由D(混浊度)=2-1 gT求出混浊度。 1.3.4血球计数法 操作方法：将适当稀释的样品注入血球计数板的计数室中。由于计数室内的容积已知（0.1mm3），计算一定数量刻度内的菌数，即可计算出每克或每毫升样品中的酵母菌数[10]。 2. 预测结果与分析 2.1培养基的筛选 用YEPD，Henerberg（韩尼伯格培养基），孟加拉红、PDA培养基、麦芽膏琼胶培养基5种培养基培养葡萄酒酵母菌，预测值其结果见表2-1。 表2-1 葡萄酒酵母菌接种五种不同培养基的培养结果 编号 培养基 菌落出现 接种液 菌落数 对照 1 YEPD 72h 10-4 25 0 10-6 10 2 孟加拉红 48h 10-4 30 0 10-6 20 3 henerberg 72h 10-4 20 0 10-6 10 4 PDA培养基 72h 10-4 20 0 10-6 10 5 麦芽膏琼胶 48h 10-4 20 0 10-6 10 五种培养基培养的菌落均为圆形，灰白色。挑取培养菌种在显微镜下观察， 酵母形态为圆形、椭圆形，主要为葡萄酒酵母(saccharomycesellpsoideus)。孟加拉红培养基菌落长出的时间最短为48h，菌落数最多为30(10-4)和20(10-6) (图2、3)；其次YEPD培养基为25 (10-4)和12(10-6)；最差为麦芽膏琼胶培养基20(10-4)和10(10-6)。此外，孟加拉红培养基菌落分布均匀，菌落的面积也明显大于其它培养基。 2.2 活菌计数法 表2-2 YEPD和孟加拉红培养基菌落培养结果（