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外周血淋巴细胞微核检测 佛山市中医院检验科 陈海生 概念： 微核是位于细胞浆中独立于主核的核小体主核完全脱离,直径约为主核的1 /20～1 /3。形态是较规整的圆形或椭圆形小体。染色质结构与主核相似,边缘光滑,染色同染色质或稍淡,无明显折光性。在生物、物理、化学等外界因素作用下,细胞染色体丢失或断裂,在细胞分裂后期,这种染色体如果仍留在子细胞质内,形成一个或几个规则的次核,即为微核 (卫星核) 微核的形成 微核形成与染色体断裂、缺失,以及染色体畸变的发生高度相关,检测微核可以间接反映染色体受损情况。 通常检测微核反映机体所受环境诱变剂、致癌剂、X射线及其他有害因素所引起的染色体损伤程度 参数 ①微核人员检出率:检出淋巴细胞微核的人员占该组总人数的百分率。 ②微核阳性检出率:超出微核正常值上限的人数占该组总检出人数百分率 ③微核细胞率:每1 000个淋巴细胞中含微核的淋巴细胞数量 ④微核率:每1 000个淋巴细胞的微核数量。 后两者均以千分率表示。 方法 一.淋巴细胞普通培养法 二.微量血直接推片法 三.明胶制片法 方法 采取耳垂血0.1ml,肝素抗凝,与1/2 量的3% 明胶放入离心管中, 加盖混匀, 垂直至于37oC 水浴箱中自然沉降40 分钟左右。吸取上清液，注入离心管中，1000rpm/5 分钟，弃上清，取沉淀物推片，干后，甲醇固定1 分钟，瑞- 姬氏染色1 0 分钟。 微核计数标准：在油镜下观察1000 个淋巴细胞，按国家标准确定微核，即微核大小为主核的1/20～1/3，与主核核膜完全分离，形态较规正，圆形或椭圆形，染色性与主核相似或稍淡，无明显折光性。进行以下指标的检测。 外周血淋巴细胞微核检测在良性、癌前病变及恶性疾病中的意义 目前恶性肿瘤的发生率逐年升高。恶性肿瘤是癌细胞的恶性克隆性异常,其发生与机体细胞内的遗传物质损伤有着密切关系。由于微核与染色体畸变高度相关,近年来微核检测在恶性疾病研究方面受到极大重视。 国外研究-微核与恶性疾病 国外新近研究显示：未经治疗白血病患者的微核率明显高于正常对照组,分别为:正常对照组(0.187 ±0.175) ‰、急性淋巴细胞白血病(3.165±1.147) ‰、急性髓系白血病(3.155 ±1.124) ‰、慢性淋巴细胞白血病(3.103 ±1.105) ‰。 国外研究-微核与恶性疾病 据研究：提示白血病患者存在染色体断裂、丢失等异常,表现为染色体不稳定性改变,导致同位、临位原癌基因激活,抑癌基因失活,而发生肿瘤。 国内研究-微核与恶性疾病 国内研究报道：一组恶性实体肿瘤患者的淋巴细胞微核率明显增高,超过正常对照组10倍以上。有专家立项“人类微核项目”(HUMN)的研究,针对日本、意大利、瑞典为主的实体肿瘤患者,其中包括肺、胃肠、肝胆、胰腺、乳腺肿瘤。结果显示:高微核率与肿瘤发生高度相关,膀胱癌与肾癌的相对危险度(RR)可达8.123。 微核与恶性疾病 反复地或长期地处于致染色体突变环境下的高危人群,可发生染色体的异常。 微核可以反映染色体的损伤,所以机体在致癌环境下可首先表现为微核率增多,这种异常的累积导致染色体突变,最终导致恶性肿瘤的发生。 微核与恶性疾病 因此,微核检测可提前告知染色体可能发生畸变,警戒高危人群,脱离高危环境,防止继续处于高危状态,最终出现染色体异常,导致肿瘤发生。所以微核检测的意义重在于预测和监测,具有早期预测筛查恶性疾病发生的重要意义。 微核与癌前病变 动物实验已经证实,不论是成体或是胚胎期在出现恶性肿瘤前首先在血细胞或其他类型细胞中出现微核。微核先于癌前出现,更早于临床症状及体征。可以利用微核作为人体早期致癌危险性的监测。为癌症及时发现与诊断、积极实行早期干预治疗提供依据。 微核与MDS 骨髓异常增生综合征(MDS)是一组骨髓造血干/祖细胞克隆性异常疾病,临床表现为一系或多系血细胞减少,骨髓或外周血细胞有病态造血,表现为同时或先后出现红系、粒系和巨核系发育异常。其部分可以向白血病转化,实际是血液系统的癌前病变。因此,骨髓异常增生综合征的早期诊断及监测其转化具有重要意义。 　　 微核与MDS 染色体异常是导致造血细胞异常的直接原因。MDS患者在诊断时, 40%～60%有染色体异常,随着病程的进展可高达80%。总之,染色体异常在MDS中的RA或RARS发生率相对较低( 15% ～ 30% ) , 而且多为单一异常; 在RAEB 或RAEBT的发生率高达45% ～60% ,而且多为复杂异常，并且随着病程进展,可出现异常克隆增多或出现新的异常。 微核与MDS 骨髓造血干/祖细胞克隆性改变反映了病程演变是一个伴随染色体异常的渐变过程。微核是滞留在细胞质中的染色体断片或染色单体。 微核与MDS 因此,微核是