2017届高中生物专题5DNA和蛋白质技术课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段课件新人教版选修1.pptVIP

知识架构 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 知识架构 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 2.实验中DNA含量的测定 DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,峰值的大小与DNA的含量有关。可以利用DNA这一特点进行DNA含量的测定,具体方法如下: (1)稀释:2 μL PCR反应液,加入98 μL蒸馏水,即将样品进行50倍稀释 ↓ (2)对照调零:以蒸馏水作为空白对照,在波长260 nm 处,将紫外分光光度计的读数调节至零 ↓ (3)测定:取DNA稀释液100 μL至比色杯中,测定260 nm处的光吸收值 知识架构 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 ↓ (4)计算:DNA含量(μg/mL)=50×(260 nm的读数)×稀释倍数 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 知识架构 【例2】 下列有关PCR操作过程的叙述,错误的是 (　　) A.PCR反应中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌 B.PCR缓冲液和酶应分装成小份,在-20 ℃储存 C.PCR所用缓冲液和酶从冰箱拿出之后,迅速融化 D.在微量离心管中添加反应成分时,每吸取一种试剂后,移液器上的吸液枪头都必须更换 解析：为了防止外源DNA的污染,PCR反应中所用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水等,在使用前要进行高压灭菌;还要将所用的缓冲液和酶分装成小份;并且使用一次性吸液枪头,A、B、D三项都正确。在使用前,将PCR所需试剂从冰箱内拿出来,放在冰块上缓慢融化,C项错误。 答案：C 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 知识架构 一 二 知识精要 典题例解 迁移应用 知识架构 易错突破 合作探究 自主预习 易错突破 合作探究 自主预习 易错突破 合作探究 自主预习 易错突破 合作探究 自主预习 易错突破 合作探究 自主预习 目标导航 预习导引 目标导航 预习导引 一 二 三 四 一、PCR原理 1.概念:是一种体外迅速扩增DNA片段的技术,它能以极少量的DNA为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 2.DNA复制需要的条件 解旋酶、DNA母链、4种脱氧核苷酸、DNA聚合酶和引物。 3.DNA的热变性:在 80~100 ℃的温度范围内,DNA的双螺旋结构将解体,双链分开,这个过程称为变性;当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链,这个过程称为复性。? 4.PCR反应的条件 一定的缓冲溶液;DNA模板;分别与两条模板链相结合的两种引物;四种脱氧核苷酸;耐热的DNA聚合酶,一般用Taq DNA聚合酶;控制温度。? 目标导航 预习导引 一 二 三 四 二、PCR反应过程 1.变性:当温度上升到 90 ℃以上时,双链DNA解聚为单链,一般实验温度为95 ℃。? 2.复性:温度下降到50 ℃左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合,一般实验温度为 55 ℃。? 3.延伸:温度上升到 72 ℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸在TaqDNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。? PCR的变性过程实质上也是解旋,PCR的解旋和细胞内的DNA解旋有何不同? 提示：PCR在高温条件下(90~100 ℃)解旋,而细胞内的DNA在解旋酶的作用下解旋。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 三、实验操作 1.PCR仪:能够自动调控温度的仪器,实现DNA的扩增。如果没有PCR仪,可用3个恒温水浴锅代替,操作时在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。 2.微量离心管:一种薄壁塑料管,总容积为0.5 mL。? 3.微量移液器:用于添加转移PCR配方中的液体。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 四、操作提示 1.为避免外源DNA等因素的污染,实验中使用的一些用具在使用前必须进行高压灭菌。 2.PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份,并在-20 ℃储存。? 3.微量移液器的枪头在吸取试剂后必须更换。 DNA很容易吸附在玻璃的表面,而不容易吸附在塑料的表面,由此推测PCR用到的微量离心管是用何种材质加工制作的? 提示：是用塑料加工制作的。 知识精要 典题例解 迁移应用 一 二 知识架构 一、PCR的原理及反应过程 1.PCR原理 (1)概念 多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术,它能以极少量的DNA为模板,在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 (2)PCR原理 ①DNA变性:在80~100 ℃的温度范围内,DNA的双螺旋结构将解体,双链分开,这个过程称为变性。 ②DNA复性:当温度缓慢降低后,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链,这个过程称为复性。 ③DNA合成:DNA聚合酶从引物3端开始延伸DNA链,DNA合成方向总是从子链的5端向3端延伸。 知识精要 典题例解 迁移应用 一