细胞凋亡及机制检测汇编.ppt

细胞凋亡（科普诗） apoptosis 似秋叶的凋零， 告别生命之辉煌； 那难以计数的攻击、诱导， 轻启着道道程序， 逼细胞步步走向生命的末端； 啊，活性氧处处肆虐， 钙波涛惊石裂岸， 线粒体把生命之光一点一点拧淡; 危难中的细胞啊， 你沉稳不乱， DNA片片切割， 化云梯直通天堂； 细胞体分团相聚， 把生命的凝重浓集在小体上； 分别了朝夕相处的伙伴， 再见了快乐美好的时光； 这一切的一切又融入临近的胞体， 腾出的空间再写生命的篇章。  典型的凋亡小体（apoposis boby）：由透亮空泡和不透光的浓密的核碎片两部分组成。 2002年10月7日英国人悉尼·布雷诺尔、美国人罗伯特·霍维茨和英国人约翰·苏尔斯顿，因在细胞程序性死亡方面的研究获诺贝尔生理与医学奖。 Sydney Brenner 细胞凋亡与疾病发生机制的新认识 1.该“死”的细胞（如肿瘤细胞、自身反应性免疫细胞）未死，是造成肿瘤、自身免疫性疾病的主要发病机制之一。——细胞凋亡不足 2.不该“死”的细胞（如神经元、心肌细胞）死了，这与老年性痴呆、心肌缺血/再灌注损伤等发病有关。——细胞凋亡过度 胸腺细胞 胸腺细胞 细胞凋亡的过程 1.凋亡信号转导 2.凋亡基因激活 3.细胞凋亡的执行 4.凋亡细胞的清除 凋亡过程及分期诱导期 执行期 消亡期 凋 亡 诱 导 因 素 细胞凋亡的生化改变 1.DNA的片段化“梯”状条带 2.内源性核酸内切酶激活及其作用 3.凋亡蛋白酶（caspases）的激活 及其作用 1.DNA的片段化“梯”状条带为细胞凋亡主要特征 ①几乎所有凋亡细胞均有核小体间的裂 解，导致DNA 的断裂； ②DNA降解过程的特异性：不伴有组蛋 白和其它核蛋白的降解； ③染色质在核小体间的裂解是凋亡细胞 和形态改变的基础； ④DNA fragmentation是凋亡的“golden marker”。 2.内源性核酸内切酶激活及其作用 由一系列胞内信号转导环节激活，执行染色质DNA切割 3. Caspase 9 激活，需要通过CARD（caspase-recruitment domain)、Apaf-1、细胞色素c、ATP等多个因子的参与Caspases在凋亡中的主要作用 1.灭活细胞凋亡的抑制物（如Bcl-2）； 2.水解细胞的蛋白质结构，导致细胞解体，形成凋亡小体（apoposis boby）； 3.在凋亡级联反应中水解相关活性蛋白，使该蛋白获得或丧失某种生物学功能 细胞凋亡的调控 （一）细胞凋亡相关因素 1.诱导性因素 2.抑制性因素 (二)细胞凋亡信号的转导 1.细胞凋亡的诱导因素 .生理活性因子：TNF家族(Fas-L,TNF)、 TGF、神经递质(谷氨酸、多巴胺)、生长 因子撤退、GC等 .损伤相关因子：热休克、病毒感染、自由基、癌基因、抑癌基因、放射线等 .化疗药物 .毒素：乙醇、β -淀粉样肽 2.细胞凋亡的抑制因素 .凋亡相关基因的抑制作用：p53、bcl-2、bcl-XL等。 .生理性抑制剂：生长因子、细胞外基质、锌、雄激素、雌激素等 .病毒基因：腺病毒E1B、杆状病毒p35、棒状病毒IAP、牛痘病毒CrmA、EBV BHRF1等 .药物：Calpain抑制剂、caspases抑制剂、促癌剂、佛波豆蔻乙脂(PMA)等 (二)细胞凋亡信号的转导凋亡信号转导系统特点 ① 多样性：不同种类的细胞系统不同 ② 偶联性：与增殖分化的信号系统交叉偶联 ③ 同一性：多因素，共用同一系统触发 ④ 多途性：同一诱导因素启动多条信号转导途径 ㈡细胞凋亡信号的转导 ㈢细胞凋亡相关基因 抑制凋亡基因：bcl-2 促进凋亡基因： fas，P53 双向调控基因： c-myc，bclx 研究较多的有c-myc、 bcl-2、 p53、Ice、Fas/APO-1等。 1. c-myc c-myc诱导细胞增殖，也能诱导细胞凋亡。当生长因子存在，bcl-2基因表达时，促进细胞增殖，反之细胞凋亡。 2.bcl-2 第一个被确认有抑制凋亡作用的基因，存在于线粒体外膜、核膜及部分内质网中。 bcl-2相当于线虫的ced9。 Bcl-2家族可分为两类，一类是