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纸色谱法分离氨基酸 化学与材料科学学院 实验教学中心 实验目的 1、掌握纸色谱法分离物质的原理和操作技术； 2、学习如何根据不同组分的分离结果来鉴别未知试样的组分。 实验原理 定义： 纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不同物质在两相中的分配比不同而进行分离的一种微量分离方法。 实验原理 实验原理 实验原理 RF: 通常用比移值RF衡量各组分的分离程度： 实验原理 RF：物质定性分析的依据。 在进行分析工作时，可使用各组分相应的标准样品同时作对照实验。 影响因素：主要是展开剂、滤纸质量、温度等实验条件。 实验原理 本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、赖氨酸和谷氨酸。 氨基酸是无色的，在层析后需在纸上喷洒显色剂茚三酮，斑点呈现蓝紫色。 显色机理： 实验原理 实验原理 仪器试剂 主要仪器： （1）玻璃层析筒 150mm×300mm(φ×h)。 （2）层析纸条 100mm×240mm 。 （3）毛细管 直径1mm左右。 （4）喷雾器 仪器试剂 主要试剂： （1）展开剂 正丁醇:甲酸:水＝60:12:8。 （2）氨基酸标准溶液 2 g·L-1水溶液。 （3）茚三酮 1 g·L-1乙醇溶液。 （4）氨基酸混合试液 将（2）配制的三种氨基酸等量混合。 实验步骤 实验步骤——点 样 实验步骤——展开分离 实验步骤——展开分离 实验步骤——显色 实验步骤——计算RF 数据处理 （1）计算RF和△RF。 （2）定性分析。 注意事项 1.手应捏纸条顶端； 2.毛细管不能混用； 3. 纸条应垂直悬挂在层析筒中，不能卷曲； 4. 应均匀喷洒显色剂，显色剂喷洒量应适当，不能流淌。 思考题 1.实验时，能否用手指直接拿取滤纸条中部，对实验结果有何影响？ 2.为什么在纸色谱法中要采用标准品对照鉴别？ * * 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 载体——层析纸（滤纸）； 固定相——滤纸上的吸湿水分； 流动相——有机溶剂（展开剂）。 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 分离示意图 A B 上行法 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 原点 展开后斑点 溶剂前沿 a1 a2 b A B 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 RF:0～1。 RF值相差越大，分离效果越好。 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 （1） 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 （2） 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 （3） 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验目的 实验原理 仪器试剂 点样 展开分离 显色 计算比移值 实验步骤 注意事项 思考题 2.5cm 2.5cm 1 2 3 4 异亮氨酸 赖氨酸 谷氨酸 混合液 各点φ≈2mm 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 展开剂 滤纸下端浸入展开剂约0.5cm，计时。 一段时间后，前沿上升15cm左右 记下展开停止时间 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 取出层析纸，画出溶剂前沿 晾干或烘干展开剂 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 在层析纸上均匀喷洒显色剂 l00 ℃烘箱中，烘3～5min 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 用铅笔描出各斑点的轮廓 b a1 a2 a3 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 实验目的 实验原理 仪器试剂 实验步骤 注意事项 思考题 *