简单染色法和革兰氏染色法.doc

簡單染色法和革蘭氏染色法 染色的原理:因細胞表面或細胞內活化位置和染料分子產生物理作用 和化學反應（每種染料對特定的細胞物質都有特殊的親 和力）。 設備:1.載玻片 2.酒精燈 3.塑膠滴管 4.拭鏡紙 5.牙籤 6.光學顯微鏡 菌種及採樣來源:1.枯草桿菌(Bacillus subtilis) 2.大腸桿菌(Escherichia coil) 3.口腔上皮細胞 試劑:1.甲烯藍染劑 2.結晶紫染劑 3.碘液 4.酒精 5.沙番紅染劑 簡單染色的步驟: 滴1或2滴的菌液在載玻片上 利用酒精燈把水分蒸發乾 在載玻片上滴滿甲烯藍染劑,等一分鐘 以蒸餾水洗去染劑 用吸水紙吸乾水分,等乾後放在顯微鏡下觀察 革蘭氏染色的步驟: 1.滴1或2滴的菌液在載玻片上 2.利用酒精燈把水分蒸發乾 3.以結晶紫染劑(一分鐘)、碘液(一分鐘)、酒精(30秒)、沙 番紅染劑(一分鐘)，依序進行染色。 4. 以蒸餾水洗去染劑 5.用吸水紙吸乾水分,等乾後放在顯微鏡下觀察 反應和細菌外觀 革蘭氏陽性 革蘭氏陰性 細胞染成紫色 細胞染成紫色 1分 在細胞內形成CV-I複合物,細胞殘留紫色 在細胞內形成CV-I複合物,細胞殘留紫色 1分 細胞壁脫水,發生多孔性收縮,降低CV-I滲出細胞,細胞成紫色 脂質從細胞壁被抽出,增加多孔性,而CV-I從細胞移出,呈無色 30秒 細胞不受影響 便成粉紅色 1分 實驗結果: 簡單染色 微生物外觀 放大倍數 顏色 菌的種類 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 革蘭氏染色 微生物外觀 放大倍數 顏色 菌的種類 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 問題與討論: 試述革蘭氏染色法之原理、實驗步驟及各階段染色結果?妳們這組所得到的實驗結果為何? 使用的原理是利用只有存在於革蘭氏陽性菌體的核醣核酸鎂鹽蛋白質醣類複合物與染劑間的作用她會跟染劑中的結晶及碘分子形成一種無法被酒精和水所溶解的物質，保留複合物的生成。 階段 Ｇ（＋） Ｇ（－） 結晶紫 藍紫色 藍紫色 碘液 藍紫色 藍紫色 酒精 藍紫色 無色 番紅 藍紫色 粉紅色 微生物進行革蘭氏時應注意的事項為何? ａ　染色時要使用培養１８～２４小時的微生物為最佳 ｂ　微生物的取樣不要太多，因為以免染色只染到上面的微生物而下面的微生物並未染色到 ｃ　注意碘液有效配置的時間不然為會失效 ｄ　脫色時用的乙醇用量不能太多 ｅ　最好利用不同時間培養之菌種，進行多次實驗確定結果 試續簡單染色髮的原理以及在環工上之應用 主要的原理是細胞表面或細胞內活化位置與染料分子產生物理作用與化學反應，每種染料對特定的細胞物質都有特殊的親和力。 應用: 常用於廢水生物的處理時，以甲烯藍為染劑進行單染法，藉以判定活性汙泥系統中的活菌升場情形。 4.說明如何配置革蘭氏染色使用的結晶紫、碘液及番紅三種染劑 討論: 這次的實驗使否有看到所需的生物型態? 有看到，一開始看到的是整隻的，但經過調整後就可以看到裡面清楚的構造，而且都是很多很多的微生物，雖然一開始還是有點小突槌，但大致上是完成。 此次的實驗是否有需要注意的部分或要小心的細節? 需要注意要用二段水潤洗時，一定要清洗乾淨，要把染劑都洗掉，不能直接清洗正面，不然會把微生物都給洗掉，然後水分要擦乾，不然會影響到觀察微生物的實體和狀況，還有藥燒坡片時要很小心，不然會讓玻璃裂掉。 對於顯微鏡的使用，是否已經有一定程度的了解及運用? 由於前一次的實驗和這一次的實驗，讓我們了解到如何操作顯微鏡，已經知道如何去調整倍率，和如何去操作，不會在不知如何下手去使用，而且使用顯微鏡看到生物真的有種莫名的成就感呢。 4.總體來說，這次的實驗有無遇