蛋白质含量测定双缩脲试剂法实验报告.docVIP

生物化学实验报告 姓 名： 学 号： 专业年级： 组 别： 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称 实验日期 实验地点 合作者 指导老师 评分 批改日期 实验目的实验原理 材料与方法 3.1.实验材料： 3.1.1.实验试剂：①小牛血清；②6.0mol/LNaOH溶液；③双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾；④蛋白质标准液（70g/L）；⑤0.9%NaCl；⑥蒸馏水。 3.1.2.实验器材：①试管；②烧杯；③容量瓶；④加样枪；⑤刻度吸管；⑥玻璃棒 ；⑥1100分光光度计；⑦电子天平；⑧水浴锅。 3.2.实验步骤 取3支试管，做好标记，按下表操作： 加入物（ml） B（空白） S（标准） U（待测） 小牛血清（1:10） - - 0.5 蛋白质标准液（1:10） - 0.5 - 0.9%Nacl 0.5 - - 双缩脲试剂 4.0 4.0 4.0 a.各管混匀，观察各试管颜色； b.将各试管置于37℃水浴锅中加热20min，观察颜色； c.将试管中的液体倒入比色杯中，置于1100分光光度计的样品槽内，在波长540nm，以空白管调零，测S和U管吸的光度； d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管。 依据公式算出结果： 四、结果与讨论4.2.实验数据 S 0.185 0.184 0.185 0.1847 U 0.152 0.151 0.152 0.1517 结果计算：代入公式：血清总蛋白（g/L)=(Au/As)X蛋白质标准液浓度（g/L)，得出结果：血清总蛋白=57.493g/L。 4.3.结果讨论 经查阅资料得：正常成人血清总蛋白含量为60～80g/L，而小牛血清总蛋白含量比正常成人血清总蛋白含量略低一点，本次结果得出小牛血清总蛋白含量为57.493g/L，符合情况。 4.3.1.成功原因： ①本次试验的试剂混合水浴后出现了预期效果：B试管呈淡蓝色，S试管和U试管均成浅紫色，且S试管的颜色比U试管的颜色深。B试管呈淡蓝色是因为B试管中没有发生任何反应，所以呈现双缩脲试剂本来的淡蓝色，而S试管和U试管呈浅紫色是因为试剂中的蛋白质和双缩脲发生了双缩脲反应而呈浅紫色。 ②吸光度测试后得到的数据，经计算后得到了预期中的结果，是因为前面操作严谨。 4.3.2.误差分析 ①三次重复测定过程中出现了一些浮动数据，可能是因为仪器本身存在的可允许的误差范围。 ②第一次尝试使用分光光度计的时候得到了负值，经查明是因为放置在其内的比色杯将磨面对准了通光面，经调整后，获得了正确的数据。 4.4.课后复习题 4.4.1.什么叫双缩脲试剂？为什么要在双缩脲试剂中加入酒石酸钾钠和碘化钾？ 答：双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂遇到蛋白质显紫色它是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1g/氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/硫酸铜和酒石酸钾钠配制。 测定次数 1 2 3 平均吸光度 管号 管号