薄层层析法测定苦荞中黄曲霉毒素B1影响因素的研究.docVIP

薄层层析法测定苦荞中黄曲霉毒素B1影响因素的研究 　　摘 要：本试验主要研究采用薄层层析法测定苦荞中黄曲霉毒素B1过程中，pH值、NaCl含量、油脂含量、蔗糖含量和芦丁含量对试验结果的影响。结果表明，在偏酸性环境（pH约为6），油脂含量为5%，NaCl含量5%及蔗糖含量8%，芦丁含量大于4.0%的条件下采用薄层层析法测定苦荞中黄曲霉毒素B1能够得到比较准确的结果，若样品中这些因素含量过高时就需要采用脱盐、脱脂、调整pH值等方法预处理后，方能进行黄曲霉毒素B1的测定。 　　关键词： 薄层层析法；黄曲霉毒素B1；苦荞 　　中图分类号：S517 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20150832009 　　前言 　　四川凉山彝族自治州位于四川省西南，由于独特的地理气候条件，非常适合苦荞麦的生长，使得这里成为了世界闻名的“苦荞之乡”。随着近些年对苦荞中所含生物黄酮（VPP）的开发利用，凉山的苦荞产业逐渐壮大。开发出了诸如苦荞茶，苦荞萨琪玛，苦荞酒，苦荞酱油等多种苦荞制品，深受广大消费者的喜爱。 　　苦荞麦在存储过程中，由于储存条件不当或其他外界条件的影响，特别容易受到黄曲霉菌和寄生曲霉菌等真菌的污染而产生黄曲霉毒素[1]，黄曲霉毒素是具有强致癌性和强致畸性的毒素，如果人体摄取过量，将会对人体造成严重的损伤。因此在生产苦荞产品时，对苦荞原料中黄曲霉毒素含量的测定就显得特别重要。 　　本试验主要研究采用薄层层析法测定苦荞中黄曲霉毒素B1过程中，pH 值、油脂含量、蔗糖含量、芦丁含量和NaCl含量对试验结果的影响，为采用薄层层析法测定苦荞制品中黄曲霉毒素B1提供科学指导[3]。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 试验原料 　　苦荞粉（西昌市售）；蔗糖、菜籽油、食盐 　　1.1.2 仪器和设备 　　HZK-FA210电子天平，福州华志科学仪器有限公司；微量移液枪；薄层层析板（硅胶G）；微量注射器（25ul）；三用紫外分析仪，上海顾村电光仪器厂；HY-4调速多用振荡器，江苏金坛市金城国胜实验仪器厂；层析缸；干燥箱，上海亚荣生化仪器厂。 　　1.1.3 试验试剂 　　黄曲霉毒素B1 标品，购买至北京华安麦科生物技术有限公司；甲醇；三氯甲烷；氯化钠；醋酸；氢氧化钠；芦丁；正己烷；石油醚；乙腈；苯；无水乙醚；丙酮；三氟乙酸；无水硫酸钠；苯-乙腈混合液体积比为98：2；甲醇水溶液体积比为55：45。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 pH值对薄层层析法测定黄曲霉毒素B1的影响试验 　　取5g苦荞芯粉样品，对其进行样液提取得到样品提取液，通过加入0.5mol/L的氢氧化钾溶液或者0.5mol/L的醋酸溶液，调整样品溶液的pH值使之分别达到2.0，4.0，6.0，7.0，和8.0，然后通过薄层层析法进行单向展开，通过比较样液与标液荧光强度来测定黄曲霉毒素B1含量。 　　1.2.2 油脂含量对薄层层析法测定黄曲霉毒素B1的影响试验 　　预先向苦荞粉中加入菜籽油，使苦荞粉中油脂含量分别达到0%，2%，5%，10%，15%。称取5g处理过的苦荞粉样品，对其进行样液提取得到样品提取液，通过薄层层析法进行单向展开，通过比较样液与标液荧光强度来测定黄曲霉毒素B1含量。 　　1.2.3 蔗糖含量对薄层层析法测定黄曲霉毒素B1的影响试验 　　预先向苦荞粉中加入蔗糖，使苦荞粉中蔗糖含量分别达到0%，2%，6%，10%，14%。称取5g处理过的苦荞粉样品，对其进行样液提取得到样品提取液，通过薄层层析法进行单向展开，通过比较样液与标液荧光强度来测定黄曲霉毒素B1含量。 　　1.2.4 芦丁含量对薄层层析法测定黄曲霉毒素B1的影响试验 　　经测定试验用苦荞粉中芦丁含量为1.2%，按比例向苦荞粉中加入芦丁，使得苦荞粉中芦丁含量分别达到1.2%，2%，3%，4%和5%。称取5g处理过的苦荞粉样品，对其进行样液提取得到样品提取液，然后通过薄层层析法进行单向展开，通过比较样液与标液荧光强度来测定黄曲霉毒素B1含量。 　　1.2.5 NaCl含量对薄层层析法测定黄曲霉毒素B1的影响试验 　　预先向苦荞粉中加入NaCl，使苦荞粉中NaCl含量分别达到0%，2%，4%，6%，10%。称取5g处理过的苦荞粉样品，对其进行样液提取得到样品提取液，然后通过薄层层析法进行单向展开，通过比较样液与标液荧光强度来测定黄曲霉毒素B1含量。 　　1.3 苦荞粉中黄曲霉毒素B1含量的测定方法 　　称取5.0g苦荞粉，按照GB/T5009.22-2003食品中黄曲霉毒素B1的测定方法进行提取，活化，点样，展开与观察并按下式进行黄曲霉毒素B1的含量的计算[1]，计算公式如下： 　　2 结果与讨论