单核增生李斯特氏菌检测概述__培训课件.ppt

血平板 伊氏李斯特氏菌 ATCC 19119 24h，35℃培养 单核增生李斯特氏菌检测流程 25g样品+225ml BLEB基础（加入丙酮酸钠） 加入萘啶酮酸、盐酸吖锭黄、放线菌酮 30℃ 4hr 划线接种OXA平板 30℃ 24hr和48hr 科玛嘉李氏菌显色培养基 TSA-YE分纯 35℃ 24hr-48hr 35℃ 24hr 过氧化氢酶试验、革兰氏染色、溶血试验、糖发酵试验（木糖、鼠李糖） API Listeria 35℃ 24-48hr 报告结果 35℃ 18-24hr 方法名称 一次增菌 二次增菌 分离 鉴定 快速方法 SN 0184 -1993 加工 MBP 30℃，18-24h EB 30℃，24/48h MMA/ OXA （35℃，24-48h） 蓝色菌落；典型运动；过氧化氢酶；革兰氏染色；溶血试验；尿素酶试验；硝酸盐还原；MR-VP；三糖铁；糖发酵；动力试验；协同溶血*；血清学检验*；小鼠毒力试验* 无 未加工 EB （30℃，24/48h） GB/T 4789.30-2003 EB （30±1℃，48h） MMA （30±1℃，24-48h） 蓝色菌落；三糖铁；动力试验；染色镜检（革兰氏染色、典型运动）；生化特性（溶血反应、硝酸盐还原、尿素酶、MR-VP、糖发酵）；小鼠毒力试验；协同溶血 无 LB1 （30±1℃，24h） LB2 （30±1℃，24h） FDA BLEB+Phy （30℃，4h） BLEB+Phy+三种抑菌剂 （30℃，20/44h） OXA/PALOM/MOX/LPM+七叶灵+Fe3+ 推荐BCM /ALOA / RapidLmono /CHROMagar Listeria 蓝色菌落*；典型运动或动力试验；过氧化氢酶；革兰氏染色；溶血试验；硝酸盐还原*；糖发酵；协同溶血；血清学检验；小鼠毒力试验* 筛选、鉴定都可以使用快速方法 USDA UVM （30±2℃，22±2h） FB （35±2℃，26-48±2h） MOX （35±2℃，26-48±2h） 初步鉴定：纯菌菌落形态；典型运动； 生化鉴定：MICRO-ID? Listeria或Api? Listeria或BAM等方法中的传统生化反应；协同溶血 遗传鉴定：核糖体RNA检测；PFGE* 筛选用的快速方法必须经过确认后才可使用 鉴定中用到MICRO-ID? 、Api?、GenProbe AccuProbe?、GENE-TRAK? 各官方方法比较 各官方方法比较 方法名称 一次增菌 二次增菌 分离 鉴定 快速方法 CFIA MFHPB-30 LEB（UVM） （30℃，24/48h） MFB （35℃，24-48h） OXA+LPM或MOX或PALCOM 典型运动或动力试验；溶血试验；甘露醇；木糖；鼠李糖；快速鉴定试剂盒*；过氧化氢酶*；革兰氏染色*；协同溶血*；血清学试验* 作为鉴定的可选步骤，允许使用快速方法，如Vitek或API、Micro ID Listeria、Listera Accuprobe? ISO 11290-1:1996（E） 半量Fraser肉汤 （30℃，24±2h） Fraser肉汤 （35或37℃，48±2h） OXA和PALCOM （30、35或37℃，24-48h，） PALCOM平板微需氧或好氧条件培养 蓝色菌落*；过氧化氢酶；革兰氏染色；动力试验或典型运动*；溶血试验；糖发酵试验；协同溶血；送参考实验室（血清或噬菌体分型） 无 NMKL No.136 2nd 1999 LBⅠ （30.0±1.0℃，24±3h） LBⅡ（30.0±1.0℃，24±3h）或Fraser肉汤（37.0±1.0℃，48±4h） OXA和PALCOM （37.0±1.0℃，24±3/48±4h，好氧或微需氧） 溶血试验；过氧化氢酶；革兰氏染色；典型运动 动力试验；糖发酵试验；送参考实验室（血清、噬菌体、DNA或酶分型） 允许使用经过确认的商业化生产的单核增生李斯特氏菌菌株鉴定试验，但没列明具体试剂盒名称 红肉、禽、蛋和环境样品中分离和鉴定单核增生李斯特氏菌的方法 红肉、禽、蛋和环境样品中分离和鉴定单核增生李斯特氏菌的方法 FDA：李斯特氏菌属的快速筛选试剂盒 Table 2.?Listeria Genus Detection Test Kits Prescribed for Regulatory Screening AOAC Official Method 993.09. 2000. Listeria in dairy products, seafoods, and meats. Colorimetric deoxyribonucleic acid hybridization method (GE