01-组织学绪论幻灯片.pptVIP

图1-8 电镜免疫细胞化学染色（胶体金标记第二抗体法） 箭头示狒狒下丘脑酪氨酸羟化酶阳性轴突内的胶体金颗粒 图1-9 原位杂交光镜像 高倍 A．35S标记前列腺特异抗原（PSA）cDNA探针，放射自显影显示人前列腺上皮内PSA mRNA的表达，苏木精复染　 B．地高辛精标记蛋白激酶C（PKC）β1寡核苷酸探针，免疫细胞化学显示大鼠海马锥体细胞内PKCβ1 mRNA的表达 图1-10 培养的大鼠骨髓间充质干细胞 高倍 图1-11 人耳形组织工程软骨 图1-12 培养的人白血病HL-60细胞 Hoechst 33258和碘化丙啶染色 高倍 A．活细胞　B．凋亡细胞　C．坏死细胞 第1章 组织学绪论 Introduction of Histology 一、组织学的研究内容和意义 组织学（histology）是研究机体微细结构及其相关功能的科学。只有学好组织学，认识人体的微细结构及其相关功能，才能全面掌握人体的形态结构，探索生命现象的物质基础。也只有认识了人体的正常结构，才能更好地分析和理解人体的生理过程和病理过程，才能学好生理学、病理学及其他医学基础课程和临床课程。 二、组织学发展简史 1．显微镜的发明和细胞的发现； 2．显微镜的改进和细胞学说的确立； 3．组织概念的提出和组织学的建立诺贝尔奖； 4．现代组织学的发展。 三、组织学的研究方法和技术（一）普通光镜标本的制备和光镜观察 应用普通光镜观察组织切片是组织学研究的主要技术，可获得有关组织细胞结构与功能的许多信息。光镜的放大作用由其光学部分实现，后者主要由聚光镜、物镜和目镜组成 （图1-1）。 生物组织和器官不能直接在光镜下观察，制备能使光线透过、微细结构清晰可辨的组织切片是组织学研究的基本方法，主要包括固定、切片、染色等步骤，常用石蜡切片、HE染色。 石蜡切片 组织块必须有一定的硬度方可切成薄片。首先用酒精和二甲苯将固定后的组织块脱水(dehydration)和透明(clearing)，再用熔化的石蜡浸透、包埋(embedding)，制成有一定硬度的组织蜡块，然后用切片机(microtome)将其切成5～10 μm厚的组织切片(tissue section)，贴于载玻片上(图1-2) 。上述方法称石蜡切片(paraffin sectioning)，是组织学中的常规切片方法。 HE染色 组织学中最常用的染色方法是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）染色法，简称HE染色法（HE staining）。苏木精使细胞核和细胞质中的核糖体等酸性物质染成紫蓝色，伊红使细胞质和细胞外基质中的碱性成分染成淡红色。与碱性染料亲和力强、易被染色的特性称嗜碱性（basophilia）；与酸性染料亲和力强、易被染色的特性称嗜酸性（acidophilia）；若与两种染料的亲和力都不强，则称中性（neutrophilia）。 （二）激光共聚焦扫描显微镜 激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope，CLSM)是一种高光敏度与高分辨率的生物学仪器，主要由激光光源、共聚焦成像扫描系统、光学系统和计算机图像分析系统4部分组成。CLSM光源产生激光束，并通过入射针孔的光阑作用入射到样品各点上。另外，在发射光检测光路上有一个检测针孔，检测针孔和入射针孔的位置相对于物镜的焦平面是共轭的，即所谓“共聚焦”。经样品反射的光通过透镜成像，被探测器接收，再经过光电信号转换在显示屏上；图像同时被传送到计算机图像分析系统，进行二维或三维的分析处理（图1-3）。 （三）电子显微镜术 电镜（Electron Microscopy）不同于光镜之处是用电子束代替可见光，用电磁场代替玻璃透镜。电镜又分为透射电镜术和扫描电镜术。 各种显微镜的分辨率与人眼的比较 分辨率 人眼 0.2 mm 普通光镜 0.2 μm 透射电镜 0.1~0.2 nm 扫描电镜 2.5 nm l．透射电镜术 透射电镜术（Transmission electron microscopy）　用电子束穿透标本，经过电磁透镜的会聚、放大后，在荧光屏上成像，直接观察，或将影像投射到照相底片，制成电镜照片进行观察。透射电镜的分辨率可达0.1～0.2 nm，放大倍数从几千倍到几十万倍。由于电子束穿透力弱，电镜标本需制成50～80 nm的超薄切片。 2．扫描电镜术 扫描电镜术（Scanning electron microscopy） 用于观察细胞、组织和器官表面的立体微细结构。将小块组织（直径约0.3 cm）经固定和临界点脱水干燥后，在其表面喷镀薄层碳膜和金属膜。扫描电镜发射的细电子束在样品表面按顺序逐点移动扫描，使样品表面金属膜发射出电子（称二次电子），二次电子信号被探测器收集，