PCR染色体DNA提取.docVIP

PCR、染色体DNA提取 选择题 1.关于PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中（B）项不是主要原因。 A.底物（模板）过剩 B.dNTP的大量消耗 C.产物的聚集 D.非特异性产物的竞争性抑制 2.Clark作了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加（B） A. dGTP B.dATP C.dCTP D.dTTP 3.有简并引物的3’端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（A） A. TaqDNA聚合酶具有一定的不精确性 B.便于排除错误碱基的掺入 C.易于退火 D.易于重组连接 4.PCR实验的特异性主要取决于（C） A.DNA聚合酶的种类　　　　B.反应体系中模板DNA的量 C.引物序列的结构和长度　　 D.四种dNTP的浓度 E.循环周期的次数 5.有关PCR的描述下列哪项不正确：（D） A.是一种酶促反应 B.引物决定了扩增的特异性 C.扩增的产量按Y m 1+X n　　D.扩增的对象是氨基酸序列 E.扩增的对象是DNA序列 6.有关PCR的描述下列哪项正确： ABC A.polymerase chain reaction的字首缩写 B.1993年获诺贝尔化学奖 C.已广泛的应用于医学各学科 D.能够准确对扩增模板定量 E.以上都对 7.PCR反应产物的特异性取决于 E A镁离子浓度 B退火温度 C引物碱基组成和长度 D循环次数 E.A+B+C 填空 1.Clark发现用TaqDNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的 。 2.在简并引物的设计中，常常要用到dI（次黄嘌呤），原因是 。 3.简并引物PCR主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计 引物来合成相应的基因。 4.SSC是由NaCl和柠檬酸钠组成的试剂，其中NaCl的作用是使 ，而柠檬酸钠的作用是 。 KEY 1.T-载体 2.dI可以和任何载体相匹配 3.一组混合 4.DNA溶解；作为螯合剂抑制核酸酶的活性 简答题 1.你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA，请从所列出引物中选出合适的一对， 5’-GACCTGTGGAAGC CATACGGGATTG-3’ 3’-CTGGACACCTTCG GTATGCCCTAAC-5’ 引物1 引物2 5’-GACCTGTGGAAGC 5’-CATACGGGATTG 5’-CTGGACACCTTCG 5’-GTATGCCCTAAC 5’-CGAAGGTGTCCAG 5’-GTTAGGGCATAC 5’-GCTTCCACAGGTC 5’-CAATCCCGTATG 答：引物1：5’-GACCTGTGGAAGC； 引物2：5’-CAATCCCGTATG 2.PCR反应包括引物与DNA模板链间的解链与复性。讨论循环温度范围对引物-DNA双螺旋稳定性的影响及对PCR产率的影响。 答：由于GC对间是三个氢键的作用力，比两个氢键作用力的AT对要稳定，因此DNA的解链与退火都是依赖于G+C的含量与A+T的含量的比例。GC对普遍比AT对更倾向于非特异性的复性，所以GC含量高的引物比AT含量高的引物更适合于PCR反应。 PCR的基本原理是什麽？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什麽样的信息？ （1） 利用DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。 （2） 至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。 3.何谓简并引物？简并引物设计的一般原则是什麽？ 答：简并引物是指根据肽链的氨基酸序列（或部分序列），并充分考虑密码子的简并性而设计的，用于PCR扩增的混合引物之间具有不同的碱基组成，但碱基数量是相同的。由于充分考虑了密码的简并性，在这种混合引物中必定有一种引物可以和该基因的DNA序列精确互补。 简并引物设计的一般原则是： （1） 选择保守区设计简并引物； （2） 选择简并性低的氨基酸密码区设计引物； （3） 注意密码的偏爱性； （4） 使用尽可能短的引物，以降低简并性，最短可用15~20个碱基。 （5） 由于TaqDNA聚合酶在PCR扩增时容易掺入错误碱基，所以设计的引物，其3’端尽量使用具有简并密码的氨基酸。 4.在古生物学中，尚不知道恐龙是否是温血爬行动物，而不像今天的变温爬行动物。假如你得到一些恐龙的DNA，你如何通过PCR和基因克隆来检测恐龙是否是温血爬行动物？ 答：用PCR扩增恐龙的高度保守的酶的基因，然后将扩增的DNA克隆到大肠杆菌表达载体，每可能被合成。然后测定酶的最适温度和热的稳定性并与相应的温血动物（如鸟类）进行比较。来自于冷血动物的酶与来自于温血动物的酶相比，温血动物最适的温度范围较宽。 5.PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同