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牧场检测新技术上海光明荷斯坦牧业有限公司·研发中心叶耿坪 博士联系方式箱：yegengping@PathoProof 乳房炎PCR诊断与药敏检测技术二、乳房炎的发病率三、乳房炎的经济损失三、乳房炎的经济损失（续）您是否为乳房炎发病率居高不下而不知所措？您是否在为个别牛只反复发病而痛苦不已？？你是否还在为你的乳房炎奶牛治疗无效而一筹莫展？？？荧光定量PCR为您排忧解难！荧光定量PCR，让细菌无所遁形！！实时荧光定量PCR技术原理 一种实时监控核酸扩增的技术在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化对PCR过程进行实时监控，以此实现对初始模板的定量分析。 大量PCR产物实时荧光定量PCR工作过程PCR反应液中加入了发光物质PCRPCRDNA片段实时荧光定量PCR工作过程（续） 每个循环结束后，定量PCR仪器通过光学系统记录荧光信号的增加 。实时荧光定量PCR工作过程（续） 最后，定量PCR软件计算出数据，通过数据分析软件进行分析 。采 样样品采集：乳头末端用酒精或甲基酒精浸泡的棉球消毒，从最远的乳头开始，一个乳头一个消毒拭子；采集奶样时尽量保持采样平水平，不要污染瓶口；每个乳区采1到2把奶，从最近的乳头采；采样前准备：标签无菌采样瓶和提前填写时间；保证手的清洁，戴手套；清洁乳头；挤前药浴保持30秒接触时间；一头牛一条毛巾；挤出头几把奶；样品送检：冷藏样品直至送到实验室。如果样品不能在24小时内送到实验室，需要冷冻保存或加入防腐剂。乳房炎诊断方法比较PCR优点： ① 可分析鲜乳或添加溴硝丙二醇防腐剂保存了三个月的乳样本； ② 准确、快速、便捷； ③ 100 % 特异性-可鉴别出奶样中所有细菌DNA； ④ 细菌培养至少2-3天(支原体多达10天)，PathoProof 乳腺炎PCR 检测系统只需3-4小时； ⑤ 样本常温运输，使牛奶跟踪样本（DHI样本）能首次用于乳腺炎 检测项目； ⑥ 可检测治疗期间的样本，不受抗生素影响；药敏检测通过先进的实时荧光PCR技术我们可以准确的判定牛乳房炎是受何种微生物感染。如何提供一个准确可靠的用药指导呢药敏实验-----纸片扩散法 将含有抗菌药物的纸片贴在乙接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分，溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围如果细菌被抑制就会形成一个透明圈即抑菌圈，根据抑菌圈的大小反应其敏感程度。受诸多因素影响药敏实验-----MIC法 测定抗菌药物抗菌活性大小的一个指标，指在体外培养细菌18~24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最低药物浓度。常规试管法仪器自动化——96孔板法PathoProof药敏检测原理在检测板生产的过程中已经加入干燥的荧光底物。荧光底物包含了若干荧光物质与底物连接。当这两种物质连在一起，底物抑制荧光物质产生荧光。当细菌与底物反应，打开这两种物质间的连接，使荧光物质可以产生荧光。Auto Reader自动微生物药敏分析系统1.全值MIC药敏板 避免推测性的结果和折点判断能够检测新型耐药2.自动快速3.结果准确，无需对结果进行猜测或是重复试验4. 减少工作量和成本支出5.无需附加试剂和废液回收