动物细胞培养和核移植技术---一轮复习要点.pptVIP

◆动物细胞培养 ◆动物细胞融合 ◆单克隆抗体制备 ◆动物体细胞核移植技术和克隆动物 2.2 动物细胞工程 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 资料：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植。 §2.2.1动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养 （一）概念： （二）原理： 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 细胞增殖 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 （三）过程 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 5、为什么要制成细胞悬液？ 细胞生命力旺盛，分化程度低，分裂能力强。 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ （1）扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。 （2）解除接触抑制 3、为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？ 动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胃蛋白酶PH为2，会失活。胰蛋白酶PH为7.2-8.4。 4、用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？ 控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。 因为动物细胞培养用的是液体培养基 传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变） 继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。 6、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样 最终培养成新个体？为什么？ 不能。动物体细胞不具有全能性。 动物细胞培养的结果：使细胞数目增多。 7、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的主要区别是什么？ ▲细胞系：传代50代以后不能再传下去，部分细胞遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。 ▲细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。 强调一：细胞贴壁 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 液体合成培养基（葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等），通常还需加入血浆、血清等天然成分。 温度36.5±0.5度，pH7.2～7.4 95%空气和5% CO2 O2是细胞代谢所必需的。 CO2维持培养液的pH。 （四）动物细胞培养的条件: 对培养液和所有培养用具无菌处理； 培养液中添加抗生素防止培养过程中污染； 定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 （五）动物细胞培养技术的应用: 1.蛋白质生物制品的生产 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞 3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 筛选抗癌药物 植物组织培养和动物细胞培养的比较： 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 取材 其他条件 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1、定义： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 3、分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。 2、原理： 动物细胞核具有全能性 ◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？ ◆激活方法： ◆激活目的： ◆促融方法：电刺激 ◆胚胎移植至代孕受体内 妊娠、分娩 4、核移植流程 供体：优良性状 受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养） 1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 供体细胞（供核） 卵母细胞MⅡ中期 ◆特别注意：克隆动物性状与供体动物完全一样吗？ 不可能！因为： 核移植流程: 1、供体细胞的采集与培养 5、用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成减数分裂进程。 6电刺激促融使供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎。 4、将供体细胞注入去核卵母细胞 3、显微操作去除卵母细胞中的核 2、受体卵母细胞的采集与体外培养 7、胚胎移植入代孕母牛体内 8、妊娠分娩与供体遗传物质基础相同的犊牛。 5.体细胞核移植技术的应用前景 5.体细胞核移植技术存在的问题 看书