肝素的效价测定.pptVIP

肝素的效价测定;肝素的简单介绍;肝素的效价测定简介;肝素的效价测定步骤;标准稀释液的配置 精密量取标准溶液，按高、中、低剂量组（ds3、ds2、ds1 ）用0.9%氯化钠溶液配成三种浓度的稀释液，相邻两浓度的比值（r)应相等；调节剂量使低剂量组各管的平均凝结时间较不加肝素的对照组明显延长。 高剂量组各管的平均凝结时间，用新鲜兔血者以不超过60min为宜，其稀释一般可配成每毫升含肝素2~5单位，r为1:0.7左右; 用血浆者以不超过30min为宜，其稀释一般可配成每毫升含肝素0.5~1.5单位，r为1:0.85左右。;供试溶液与稀释液的配置 按供试品的标示量货估计效价（AT )照标准溶液与稀释液的配置法配成高、中、低（dt3、dt2、dt1）三种浓度的稀释液。相邻两浓度之比值（r）应与标准稀释溶液相等，供试品与标准品各剂量组的凝结时间应相近。;血浆的制备 迅速收集兔或猪血置预先放有8%枸橼酸钠溶液（别名：柠檬酸钠，具有抗凝血作用）的容器中，枸橼酸纳液与血液容积之比为1:1.9，边收集边轻轻摇晃，混匀，离心约20min，立即分出血浆，分成若干份装于适宜容器内，低温冻结贮存，临用时置37℃±0.5℃水浴中融化，用两层纱布滤过（主要是滤掉未融化的冰渣），使用过程中在4~8℃放置。;效价检定 ①新鲜兔血：取管径均匀（0.8cm*3.8cm）、清洁干燥的小试管若干支，每管加入一种浓度的标准或供试稀释液0.1ml，每种浓度不得少于3管，并标上A3 、B3 、C3 、A2 、……以示区别，各试管的支数相等。取刚抽出的兔血适量，分别注入小试管内，每管0.9ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，将小试管置37℃±0.5℃恒温水浴中，从采血时起至小试管放入水浴的时间不得超过3min，注意观察和记录各管的血凝血的时间。;②血浆：取上述规格的小试管若干支，分别加入血浆一定量，置37℃±0.5℃恒温水浴中预热5~10min后，依次每管加入一种浓度的标准或供试稀释液及1%氯化钙液（每种浓度不得少于3管，各浓度的试管支数相等），血浆、肝素稀释液和氯化钙液的加入量分别为0.5ml、0.4ml和0.1ml，加入氯化钙溶液后立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，注意观察并记录各管的凝结时间，???各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。