标准病理组织制片和染色技术详解.ppt

病理组织制片和染色技术 ;一、前 言 　 病理组织制片和染色技术是病理学的重要组成部分，病理的教学、科研、临床活检、尸解检验、诊断等都离不开制片染色技术工作。因此，组织的制片和染色技术是研究病理学的重要的方法和手段之一。 ; 近年来病理技术不断发展，如特殊染色、组织化学、免疫组织化学（免疫荧光组织化学、免疫酶组织化学）细胞培养、原位分子杂交、放射自显影、原位PCR技术等在广泛的应用和提高，大大促进了病理学科的发展，把病理学推进了一个新的领域，但这些新技术也都建立在病理组织制片或染色基础上，所以要认识制片和染色技术的重要性，不但要学习新技术，更要掌握这一传统的病理技术，共同推向病理学科的发展。 ; 组织制片技术的应用，从1665年由Hook发现细胞开始已300多年历史，最早应用冰冻切片随后又发展了石蜡切片，后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡（聚乙二醇）、塑料、包埋组织而制作切片。 ; 从而观察不同的组织、细胞的形态结构，以及细胞内某些化学成份含量变化。 ;; 组织取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、烤片、脱蜡、各级酒精、水洗、常规染色、脱水、透明、树胶封固。;冰冻制片程序;非切片 （了解内容） 1 整体封藏法－低等动物自身薄片如：鱼鳞片、蛙胚。 2 涂片法－如：血液、精液、痰、胸腹水等 3、磨片法－主要用有钙盐坚硬材料，牙齿、介壳、坚骨－手工磨 4 分离法a、压片法－动终板的制备b、撕碎法c压碎法;二、取材（实验病理、临床病理、尸解诊断）;1、实验病理取材 动物的杀死：动物杀死方法很多，根据动物大小、种别、观察目的而定。 ;A：断头法：青蛙、小鼠等较小的动物 B：空气栓塞法：兔猫（20－40ml） 狗100ml C：麻醉法：乙醚、氯仿、4%巴比妥 作V注射1ml/1kg，20%氨基甲酸 乙酯（尿烷）作腹腔注射5ml /1kg D：击头法：大鼠 ; E：放血法：眼球放血（小鼠） 股动脉放血，大动物：　牛、猪 原则：要尽避免使动物长时间陷入痛苦和濒于死亡状态，以免疫组织成份，结构发生变化，引起病理假象。 ;; 　 （3） 保持组织清洁：血液，污物， 粘液，食物用生理盐水洗净。 　　　（4） 保持标本新鲜：动物死后立 即固定。 (5) 切取组织大小： 0.5×0.5×0.2cm 1 ×1 ×0.3cm 1.5×1.5×0.5cm ;2 . 临床活检取材： 注意事项： （1）?申请单位姓名与标本一致，防止混乱差错。 （2）?检查标本是否符合要求—干涸坏变，固定液 多少。 （3）?取材时描写：大小，形态，色泽，硬度等。 （4）?芝麻或针帽大小组织——染伊红？：镜纸 包好 （5）?常见肿瘤取材方法：略。;3. 尸体解剖组织（脏器）取材：略。;三．固定（ fixalion） 固定：新鲜组织浸泡在适宜的化学试剂内借助于化学试剂的作用，使组织或细胞内蛋白质凝聚，沉淀，成为溶性并保持组织细胞原有的形态结构：称为固定。所使用的化学试剂配成的溶液，称为固定液。 ;　　　1. 固定的目的 　(1) 迅速防止组织细胞死后自溶和腐败 （组织失氧→释放溶酶体酶→溶解组织） (2) 固定或沉淀细胞内或组织液中蛋白，脂 肪，糖原，无机盐和色素，使其不被溶 解和消失。 (3) 使组织硬化，有一定弹性→抵抗以后的 脱水，透明，使组织发生扭曲，变形。 ; (4) 某些传染性标本，能防止疫病的扩散。 （如结核等） ?(5) 保存细胞内固有的物质：如包含体，线 粒体，溶酶体等。 ? (6) 可增强染色作用 　 (7) 有利于各种细胞折光率。 　 (8 ) 固定后能产生良好的反差。 ; 2、固定的注意事项： (1) 必须及时固定：夏天4h冬天24h就自溶。 (2) 固定液的用量：标本体积10－15倍。 (3) 固定时间：根据组织不同的种类、性质 大小、固定液的种类而