实验十一化妆品细菌总数及绿脓假单胞菌检测.docVIP

化妆品细菌总数检测 【目的】 掌握化妆品采样方法、样品处理过程、细菌总数的测定和实验结果的判定。 【卫生学意义】 化妆品是清洁、护肤、美化人民生活不可缺少的必需品，然而，化妆品在生成、储藏和使用过程中难免受到污染，同时化妆品中人工合成原料成分较多，剂型各异，不少剂型富含水分和营养成分，如蛋白质、氨基酸、维生素、无机盐等，为微生物生长繁殖提供了条件。 细菌总数系指1g或1ml化妆品中所含的活菌数量。化妆品中污染菌种类不同，每种细菌都有一定的生理特性，对营养要求、培养温度、培养时间、pH值，需氧性质等均有不同。在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求，因此所测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37℃培养48h）生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧的菌落总数。本标准采用平板计数法。 【试验材料】 样品：爽肤水，洗面奶（水溶性的） 生理盐水：90ml/瓶，1瓶/组；9ml/支，2支/组 卵磷脂-吐温80营养琼脂：1瓶/组 1ml移液器、5ml吸管：1支/组 一次性平皿：7个/组 【样品的处理】 亲水性膏、霜液体样品： 10g（10ml）+90ml生理盐水→1：10稀释液① 【菌落总数的测定】 样品的稀释：1ml①+9ml生理盐水→1：100稀释液② 1ml②+9ml生理盐水→1：1000稀释液③ 取①2ml，分别注入到2个灭菌平皿中，每皿1ml 取②2ml，分别注入到2个灭菌平皿中，每皿1ml 6个平皿 取③2ml，分别注入到2个灭菌平皿中，每皿1ml 空白对照：1ml无菌生理盐水 将冷却至45-50℃的卵磷脂-吐温-80营养琼脂倾注平皿内，15ml/皿，随即轻轻转动平皿，使样品与培养基充分混匀，待琼脂凝固后，反转平皿，置37℃培养48h。 菌落计数及报告方式。 【结果评价】参照国家卫生标准进行卫生评价:246页 化妆品中铜绿假单胞菌的检测 【试验目的】掌握化妆品中铜绿假单胞菌的检验程序和检验方法，掌握其阳性判断标准。 【卫生意义】 铜绿假单胞菌在自然界分布甚广，空气、水、土壤中均有存在。对人有致病力，常引起人皮肤化脓感染，特别是烧伤、烫伤、眼部疾病患者被感染后，常使病情恶化，并可引起败血症，因此，在化妆品中规定不得检出铜绿假单胞菌。 根据本菌生物学特征：革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓毒素。此外，还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃条件下生长等，可与类似菌相区别。 【试验材料】 铜绿假单胞菌（绿脓）：1皿/组（斜面） 玻片：讲台上 氧化酶试纸：用时发放，1条/2组 绿脓毒素测定用培养基（L）：1支/组 硝酸盐蛋白胨水培养基：1支/组 明胶培养基：1支/组 琼脂斜面培养基（Y）：1支/组 氯仿，1mol/L盐酸（明天看结果用） 【检验程序】 【实验方法】 样品处理： 亲水性膏、霜液体样品： 10g（10ml）+90ml生理盐水→1：10稀释液。 二、增菌培养：取1：10样品稀释液10ml + 90ml SCDLP液体培养基中，37℃培养18-24h。 +：黄绿色或蓝绿色薄菌膜 分离培养： 培养液的菌膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置37℃培养18～24h，凡铜绿假单胞菌在此培养基上，其菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基扩散有水溶性色素。 在缺乏十六烷三甲基溴化铵琼脂时也可用乙酰胺培养基进行分离，将菌液划线接种于平皿中，37℃培养24h，铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不生长。 证实试验 染色镜检：革兰氏阴性杆菌。 氧化酶试验：用取菌环取待检菌涂于氧化酶试纸或直接用纸片沾取菌落，然后将纸片置于干净平皿内，30秒钟内观察结果，阳性为紫色，阴性为无色。 绿脓毒素试验：取可疑菌落2～3个，分别接种在绿脓毒素测定用培养基上（L），置37℃培养24h，加入氯仿3ml～5ml，充分振荡，用吸管将氯仿移到另一试管中，并加入1mol/L盐酸1ml左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色时为阳性，表示被捡物中有绿脓毒素存在。 4. 硝酸盐还原产气试验：取铜绿假单胞菌可疑菌落接种在硝酸盐蛋白胨水培养基中，置37℃培养24h，观察结果，凡在硝酸盐胨水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，标明该菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气。 5. 明胶液化试验：取铜绿假单胞菌可疑菌落接种在明胶培养基中，置37℃培养24h，取出放4℃冰箱10min～30min，如仍呈溶解状即为明胶液化试验阳性，如凝固