实验十二药品的无菌检查及微生物限量检测.docVIP

药品的无菌检查 【目的】掌握药品微生物检测方法的种类、控制菌种类； 了解不同药品检验的处理方法； 掌握药品无菌检查的方法 【卫生学意义】药品在生产、贮藏和使用过程中难免会受到微生物污染。不符合卫生标准的药品会对人体健康造成危害。对于规定性灭菌药物必须进行无菌检查；对于非规定性灭菌药物应进行限量菌检查。 【试验材料】 对照菌液： 金黄色葡萄球菌，10-100个菌/ml，每组1管。 白色念珠菌，每组1管 硫乙醇酸钠培养基（液体）：3管/组（样品管、阳性对照、阴性对照） 胰酪胨和酵母膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供可发酵有糖类更利于生长；氯化钠维持均衡的渗透压；硫乙醇酸钠和L—胱氨酸能有效降低氧化还原电位，防止过氧化物的积累对某些菌产生毒性，同时其硫氢基团有钝化含砷、汞及其它重金属防腐剂的抑菌作用；少量琼脂的凝固作用可防止二氧化碳、氧气和还原产物的扩散；刃天青是氧化还原指示剂，氧化状态呈粉红色，还原状态无色。 临用时如果粉红色部分超过1/3高度时，应将培养基用水浴加热至无色，冷却至45℃以下时再立即接种检品，全管呈现粉红色时，不可再用。阴性对照：1ml生理盐水+硫乙醇酸钠培养基 霉菌培养基 阳性对照：样品1ml+白色念珠菌1ml+霉菌培养基 阴性对照：1ml生理盐水+霉菌培养基 混匀，硫乙醇酸钠培养基置30-35℃培养，霉菌培养基20-25℃培养7天。 【结果判断】 当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察的结果判定 如需养菌、厌氧菌及霉菌培养管均为澄清或虽显浑浊但证明并非有菌生长，均应判定为受试品合格 如需养菌、厌氧菌及霉菌培养管任何一管显浑浊并确证为有菌生长，应重新取2倍量供试品，分别依法复试，除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。 【结果评价】 规定灭菌药品不得检出需厌氧菌和真菌。 药品的微生物限量检查 【试验目的】掌握药品微生物学检测方法的种类、控制菌种类；了解不同药品检验前的处理方法；掌握药品微生物限量检查的方法。 【卫生意义】 药品在生产、贮藏和使用过程中难免会受到微生物的污染。对于非规定性灭菌药物应进行限量菌检查。 微生物限量检查法系指非规定灭菌制剂及其原料、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查（大肠埃希氏菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）。检验报告以1g、1ml或10cm2为单位。 【试验材料】 100ml无菌生理盐水1瓶/组，9ml生理盐水2支/组，1ml无菌吸管2支/组，10ml无菌吸管1支/组，无菌剪刀，镊子，酒精棉球 营养琼脂（45℃）100ml/组，玫瑰红琼脂（45℃）100ml/组。 受试物： 【实验方法】 一、采样及采样量 二、供试品的检验量 三、供试液的制备 液体供试品：用10ml无菌吸管取10ml（或10g）加入90ml无菌生理盐水中，混匀，即为供试液①（10-1稀释）。 固体供试品： 样品：酒精消毒外包装。取10g样品加入100ml无菌生理盐水中，混匀，即为供试液①（10-1稀释）。 四、检查步骤： 将供试液做10-2，10-3稀释 取①液1ml+9ml稀释液→②液 取②液1ml+9ml稀释液→③液 分别取①、②和③液1ml于4个无菌平皿中，再注入约45℃培养基约15ml，混匀，待凝固后倒置培养。 ①液： 2个：营养琼脂 2个：玫瑰红钠琼脂 ②液： 2个：营养琼脂 2个：玫瑰红钠琼脂 ③液： 2个：营养琼脂 2个：玫瑰红钠琼脂 阳性对照：1ml金葡菌+营养琼脂 1个 1ml白色念珠菌+玫瑰红琼脂 1个 阴性对照：1ml NS+营养琼脂 1个 1ml NS+玫瑰红琼脂1个 细菌培养时间为48h，计数菌落数。 霉菌、酵母菌培养时间为72h，计数菌落数。计算各稀释度的平均菌落数，按菌落数报告规则报告菌落数。 【结果判断】 从100ml无菌生理盐水中吸10ml弃去 下周1下午看结果