组化染色综合版-2.docVIP

瑞氏-姬姆萨染色 Wright’s-Giemsa Stain 4.2试剂 （1）瑞氏-姬姆萨复合染色液（I液）——瑞氏染色粉1g，姬姆萨染粉0.3g，甲醇（A.R）500ml，中性甘油3.3ml。将瑞氏染粉和吉姆萨染粉置洁净研钵中，加中性甘油研磨，再放入37℃孵箱孵育24小时后，加入少量甲醇研磨，吸出上液，如此连续几次，共用甲醇 500ml 。收集于棕色玻璃瓶中存放一周即能使用。存储时间越久染色效果越好。中性甘油可防止甲醇挥发，使细胞染色较清晰。 （2）磷酸盐缓冲液（II 液）（pH6.4～6.8）——磷酸二氢钾(K2HPO4)6.64g，磷酸氢二钠(Na2HPO4。12H2O)2.56g，用磷酸盐调整 pH，加蒸馏水至1000ml。 操作方法 （1）染色 将玻片滴加瑞氏-姬姆萨复合染色液（I液）3～5 滴，使其迅速盖满涂片，再按1：1或1：2的比例滴加磷酸盐缓冲液（II 液），轻轻摇动玻片使染液充分混合。 9．正常结果范围及结果解释 染色结果偏酸者，则红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞的核呈浅色或不着色。 染色结果偏碱，所有红、白细胞染灰蓝色，颗粒深暗。嗜酸性颗粒可染成暗褐色甚至黑紫色或蓝色。中性颗粒也偏碱（紫黑色）。遇此种情况应更换缓冲液。 铁粒染色（Iron Stain） 2．实验原理 正常人骨髓中以含铁血黄素的形式储存的铁粒属细胞外铁；而幼红细胞的胞质中含有的铁颗粒属于细胞内铁，这种细胞称为“铁粒幼细胞”。骨髓中细胞外铁和幼红细胞内的铁颗粒与酸性亚铁氰化钾溶液作用，发生普鲁士蓝反应，生成蓝色亚铁氰化钾沉淀，定位于含铁的部位。 4.3试剂配制 4.3.1酸性亚铁氰化钾溶液 4.3.1.1 把200g亚铁氰化钾溶于1000ml蒸馏水中。 4.3.1.2 取5ml 200g/L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓缓加入1ml浓盐酸。临用前新鲜配制。 4.3.2 2g/L核固红－硫酸铝溶液 取硫酸铝10g加入100ml DH2O再加入核固红EMER出品 0.2g，置于37℃水浴中1小时，并经常振荡，使溶解，过滤后使用。 贴上“2g/L核固红－硫酸铝溶液”的标签并注明配制日期和失效日期。室温保存。 5.2. 质控标准 正常的阳性结果为：外铁为＋～＋＋，铁粒幼红细胞＞20%。 6．操作方法 6.1选骨髓小粒丰富的骨髓涂片，用甲醇固定10分钟。（这一步骤可省略） 6.2玻片上滴加酸性亚铁氰化钾，染色30分钟。（可置于37℃）。 6.3用DH2O冲洗后用核固红染液复染10～15分钟。 6.4流水冲洗，晾干，油镜检查。 6.5 先用低倍镜判断细胞外铁，再用油镜计数100个幼红细胞，观察铁颗粒的多少。 7．结果报告 7.2.1细胞外铁的判断用低倍镜观察涂片的骨髓小粒，根据骨髓小粒和巨噬细胞的胞质内出现的蓝色颗粒状、小珠状或团块状的多少，把细胞外铁分为五级。 － 无颗粒 ＋ 有少数铁颗粒或偶见铁小珠 ＋＋ 有较多的铁颗粒和小珠 ＋＋＋ 有很多的铁颗粒，小珠和少数小块状 ＋＋＋＋ 有极多的铁颗粒，小珠并有很多的小块，密集成堆 7.2.2 铁粒幼细胞的判断:胞浆内出现蓝绿色颗粒的幼红细胞即为铁粒幼细胞。阳性程度的标准为： Ⅰ 型 仅含1个铁颗粒 Ⅱ 型 含2～5个铁颗粒 Ⅲ 型 含6～9个铁颗粒 Ⅳ 型 含10个以上的铁颗粒 7.2.3 环形铁粒幼细胞的判读标准：含铁颗粒6个以上，其中2/3以上的铁颗粒围绕核周围排列成完全环形或不完全环形（围绕核周围指分布紧靠着细胞核或靠近细胞核的1/3胞浆内，铁颗粒增多时，可分布于外2/3的胞浆内。 8．结果解释 8.1正常人细胞外铁：＋～＋＋。幼红细胞染为鲜红色，胞浆成淡黄红色，铁粒呈蓝绿色，定位于胞浆中含铁的部位。 8.2 缺铁性贫血时，骨髓细胞外铁和内铁显著减少或消失，铁粒幼红细胞阳性率为0～16%，平均为4%，铁颗粒极少并着色浅，以Ⅰ型为主，Ⅱ型者极少，Ⅲ型以上者不见。 8.3 溶血性贫血，巨幼红细胞贫血，脾亢，AA，AL，慢性肾炎伴尿毒症和多次输血等病人的细胞外铁可以增高，细胞内铁以Ⅰ型和Ⅱ型为主，可以见到Ⅲ型，不见Ⅳ型。因此有助于鉴别IDA与非IDA。 8.4是诊断铁粒幼红细胞贫血的重要依据，能发现数量不等的环状铁粒幼红细胞，并且多见粗颗粒的Ⅲ型和Ⅳ型铁粒幼红细胞。 8.5骨髓增生异常综合征时，细胞外铁丰富。铁粒幼红细胞的百分比增高，常见环状铁粒幼红细胞。在铁粒幼细胞性难治性贫血中，环状铁粒幼红细胞≥15%时，对诊断有重要意义。 9．注意事项 9.1玻片必须经无铁处理：将新玻片经清洁液浸泡24小时，取出后反复水洗浸入95%酒精24小时，晾干，再浸泡在5%盐酸中