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项目 DNA复制 PCR技术 解旋 方式 场所 酶 温度 结果 解旋酶催化 DNA在高温下变性解旋 细胞外 (PCR扩增仪中) 合成DNA分子 细胞内温和条件 DNA解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶 细胞内 (主要在细胞核内) 不同阶段 所需温度不同 耐热的DNA聚合酶 (Taq酶) 合成DNA片段或基因 如果基因比较短小,核苷酸序列又已知,则可以用何种方法获得目的基因? 能否把目的基因单独导入受体细胞? 基因工程技术的核心是什么? 构建基因表达载体的目的是什么? 基因表达载体的组件有哪些? 通过DNA合成仪,用化学方法人工合成,无需模板 不能,必需以基因表达载体的方式携带进去 构建基因表达载体 使目的基因在受体细胞内稳定保存、复制和表达 ①复制原点;②启动子;③终止子; ④目的基因;⑤标记基因 基因表达载体的各个元件,有何功能? (1)启动子: 位于基因的______,它是____________识别和结合的部位,驱动基因_____________。 (2)终止子: 位于基因的尾端,终止_____________。 (3)标记基因: ______________是否含有目的基因,并将含目的基因的细胞筛选出来。 (4)目的基因: 目的基因必须插入表达载体的________和________之间。 mRNA的转录 鉴别受体细胞 RNA聚合酶 首端 转录出mRNA 启动子 终止子 区分启动子、终止子和起始密码子、终止密码子? 基因表达载体为什么要有启动子? 使用受体生物自身基因的启动子才有利于目的基因的表达; 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子,只将编码序列导入受体生物中无法转录; 启动子能控制目的基因在特定的时间和空间表达,例如只在转基因动物的乳腺细胞中表达。 启动子和终止子均为结构基因________区的DNA序列,且长度远不止3个碱基,都与基因的_____过程相关联。 起始密码子和终止密码子均位于_____分子中,都只含____碱基,都与_________过程相关联。 非编码 转录 3个 翻译 mRNA 怎样使某种药物蛋白基因只在转基因牛的乳腺细胞中表达? 不同生物的DNA能够拼接重组的原因是什么? 目的基因和载体拼接的过程是怎样的? ①基本单位相同;②空间结构相同; ③碱基互补配对的方式相同。 将药物蛋白基因与______________的启动子等组件重组在一起 乳腺蛋白基因 用________切割质粒,使其出现一个切口,露出__________; 用___________切断目的基因,使其产生_________________; 将切下的目的基因片段插入质粒的______处, 再加入适量的___________,形成了一个重组质粒。 限制酶 黏性末端 同种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 构建基因表达载体的过程,使用了哪些操作工具? 将目的基因与质粒酶切,酶切产物用DNA连接酶进行连接,其中由两个DNA片段之间连接形成的产物可能有几种? 不同的基因表达载体,其构建方法是一样的吗? 基因工程的受体细胞有哪些? 目的基因导入受体细胞的过程,叫做什么? ① 载体-载体连接物; ② 目的基因-载体连接物; ③ 目的基因-目的基因连接物。 由于载体的种类不同,受体细胞的种类不同,以及目的基因导入受体细胞的方法不同,表达载体的构建会有差别。 植物细胞;动物细胞;微生物细胞 转化 三种工具 什么是转化? 目的基因导入植物细胞最常采用的方法是什么? 农杆菌易感染哪些植物,原因? 目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持_______和_______的过程,称为________。 稳定 表达 转化 农杆菌转化法 易感染_________植物和______植物,对大多数________植物没有感染能力。 原因1:农杆菌对________的双子叶植物细胞分泌的______化合物具有趋化性,从而表现出感染双子叶植物的______性; 双子叶 裸子 酚类 特异 单子叶 原因2:农杆菌的_____质粒上的_______可以转移到受体细胞,并整合到受体细胞的______________上。 T-DNA 染色体的DNA Ti 受损伤 农杆菌转化法的具体过程是什么? 将目的基因插入到农杆菌的________________上; 将含目的基因的重组Ti质粒导入__________; 将______________________导入植物细胞; 目的基因随_______插入到植物细胞的___________上; 筛选出__________________的植物细胞; 对含有目的基因的植物细胞进行_______________; 经过________和_____
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