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园林生物技术专题 课程作业 鸢尾属植物花器官 组织培养中的愈伤发生与离体再生 姓名：李康 学号指导老师：柴明良教授 BIOTECHNOLOGY 目 录 文章背景简介 文章内容概述 实验材料与方法 实验结果与讨论 总结与反思 文章背景简介 E. V. Boltenkov和E. V. Zarembo Biology Bulletin 2005年 0.242 6 文章内容概述 实验测试了玉蝉花、山鸢尾和溪荪在离体培养中花器官的 分化和形态发生能力。其中，玉蝉花离体愈伤培养中，有 通过外植体直接形成芽的器官发生，愈伤发生及花的器官 发生等现象出现。 诱导外植体的两种方式：直接器官发生和间接器官发生 体外细胞分化的途径之一是器官发生，它包括营养芽、 根和花器官等的形成。花的器官发生是指离体培养中 花芽及个体花器官形成的过程。 文章内容概述 植物的种类 植物激素的组合 影响因素 实验选取花被管和子房作为组培材料，发现花被管的基部和 子房的顶端部分可产生不定芽，但不能生根。 文章内容概述 实验证明以下激素可以诱导直接器官发生：NAA和6-BA诱导玉蝉花，2,4-D和6-BA诱导山鸢尾和溪荪；而愈伤发生则用2,4-D进行诱导。 从鸢尾属花器官中诱导不定结构的发生需要在生长 培养基中添加6-BA。 结果 表明 　　 研究鸢尾属植物花器官在体外培养中由激素诱导引起的分化和形态发生的具体特征。 文章内容概述 实验材料与方法 实验材料 实验采用远东地区的鸢尾属植物，包括玉蝉花、山鸢尾和溪荪。采用由顶叶（玉蝉花）或苞叶（玉蝉花、山鸢尾和溪荪）包裹的的花芽进行离体培养。 植物材料的采集时间分别为五月末（溪荪），六月中（山鸢尾）和六月末（玉蝉花）。 实验材料与方法 洗涤剂溶液 浸泡15分钟 0.2%的二元 酸浸泡5分钟 浸泡后无菌蒸 馏水冲洗三次 花芽 文字内容 干净 花芽 实验方法 浸泡后流 水冲洗干净 待切 花芽 去除苞片 小刀分割 最终外植体 实验材料与方法 单击添加 单击加 实验方法 采用以下花器官作为外植体：子房上部和下部、花被管、外花被裂片、内花被裂片（山鸢尾除外），雄蕊和花柱。 植物组织在MS培养基中生长，培养基中包含有50mg/L的水解酪蛋白，6g/L的琼脂以及2,4-D、NAA、6-BA和KT等植物激素。 实验材料与方法 培养基种类 培养基1：1mg/L的6-BA培养基2：0.5mg/LNAA+ 2mg/L6-BA 培养基3：1mg/LNAA+1mg/L6-BA培养基4：2mg/LNAA+ 0.5mg/L6-BA 培养基5：2mg/LNAA+ 2mg/L6-BA培养基6：1mg/L2,4-D+0.2mg/LKT 培养基7：1mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA；培养基8：2mg/L2,4D+0.2mg/LKT 培养基9：2mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA；培养基10：1mg/L2,4-D+1mg/L6-BA+ 4g/L蔗糖 玉蝉花在培养基1-6号和8-10号中培养；山鸢尾在培养基4号、6号、8号、9号中培养；溪荪的则在1号、4号和6-9号中培养。 实验材料与方法 植物材料需要在黑暗，温度22-24℃以及湿度60%的条件下诱导两个月。再生需要在光强为4000lx，光照时间为16h/d，温度为22±2℃的条件下进行。每个实验均进行2次，10个重复。在实验中获得了几种愈伤组织（图1）。 图1 (愈伤组织发生的原理。a代表玉蝉花， b代表山尾，c代表溪荪；OP代表外花被PT代表花被管，O代表子房；1-3代表致密的器官发生愈伤组织，4-7代表致密的愈伤组织，8代表松散的愈伤组织。) 实验结果与讨论 将子房组织培养在含有NAA的培养基中，损伤部分染成棕红色，色素会溶解到培养基中。不定芽出现在子房上部顶端及子房下部（图2a），更常见的是经过14天的生长之后出现在花被管的基部末端。不定芽形成的频率子房上部比下部更高。其他花器官不会再生出形态结构。 图2 玉蝉花组织体外培养；a代表子房（O）上原始芽（S）和初级愈伤组织（C）的形成 文字内容 1、玉蝉花的组织培养 实验结果与讨论 含有0.5-1mg/LNAA和大于1mg/L6-BA的1-3号以及5号培养基中有嫩梢从不定芽中发出（图2b）。 在细胞分裂素为 0.2–0.5 mg/L时，2,4-D可抑制器官发生。与此同时，高蔗糖浓度（高达4％）和6-BA（可达1mg/L）在含2,4-D的10号培养