食品毒理学(致突变).ppt

* 常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)做微核试验 PCE是红细胞成熟的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，微核容易辩认，PCE胞质含RNA，染色与成熟红细胞易于区别，故为骨髓微核试验的首选细胞群 * 正常细胞、微核细胞 * 3、染色体畸变分析chromosome aberration assay 观察染色体形态结构和数目改变，又称细胞遗传学试验。 将观察细胞停留在细胞分裂中期相，用显微镜检查染色体畸变和染色体分离异常。 * 4、显性致死试验Dominant lethal test 显性致死突变指哺乳动物生殖细胞染色体发生结构和数目变化，出现的受精卵在着床前死亡和胚胎早期死亡。 它是评价化学毒物对雄性动物的生殖细胞遗传毒性较好的方法之一。 * 5、果蝇伴性隐性致死试验Sex-linked recessive lethal test, SLRL 利用隐性基因在伴性遗传中具有交叉遗传特征，选择黑腹果蝇，给雄蝇受试物，如雄蝇的X染色体有突变，传给F1代雌蝇，再通过F1代雌蝇传给F2代雄蝇，使位于X染色体上的隐性基因在半合型雄蝇表现出来。 * * 一条染色体的两条单体在同一位置发生同源片段的变换，称为姐妹染色单体交换。由于交换是对等的，所以染色体的形状没有改变，但用特殊的培养液和处理方法可以显示出来 6、姐妹染色单体交换 Sister-chromatid exchange, SCE * * SCE的遗传学意义还不完全清楚，是否存在自发的SCE也还有争议，交换的机理尚未完全阐明，但它显然与DNA损伤和修复过程有关。作为一种简便和敏感的遗传学指标，它在诱变和肿瘤研究等领域中的应用十分广泛。例如，目前已知许多环境诱变剂、职业有害因素、抗肿瘤药物、病毒等都可以引起SCE率增加，Bloom综合征患者和某些肿瘤患者的SCE率也明显上升。 * 7、荧光原位杂交技术Fluorescence in situ hybridization, FISH 利用荧光探针，将已标记或经特殊修饰的核酸探针与已固定的组织、细胞或染色体中DNA、RNA杂交，继而通过分析标记探针在被检对象中的显示状况而达到对特殊目标顺序进行检测、定位的目的。 * An example of FISH-treated metaphase chromosomes chromosomes 1, 2, and 4 were labeled yellow with FISH and the other chromosomes were stained red. Translocations between yellow and red chromosomes are detected. The left picture represents a normal cell and the right picture is an example of reciprocal translocation with two bi-color chromosomes (indicated by two arrows). * 8.单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis，SCGE) 在单细胞水平上定量检测DNA损伤 * 原理：在电泳槽中，DNA断片在电场的作用下，由细胞核中移出，并向阳极泳动，经荧光染色后见到细胞核和移出的DNA断片，形成有如彗星一样的彗星头和彗星尾，故又称彗星试验（comet test) * 1.阴性、阳性对照的设立： 阴性对照：即未处理对照或溶剂对照 阳性对照：用某种已知能产生阳性反应的物质作对照 三、致突变试验中的一些问题 * 2.体外试验活化系统的采用 许多化合物不具有致突变性，经哺乳动物代谢才转变成致突变物。由于微生物和培养的哺乳动物细胞缺乏整体动物体内的许多代谢能力。必须加入代谢活化系统以检出前致突变物。 * （1）盲法观察 （2）阴性对照和阳性对照的设立 （3）资料的统计学分析 （4）试验结果的重现性 3.致突变试验的质量控制措施 * 4.阴性结果的判定条件 ① 最高剂量应包括受试物溶解度许可或灌胃量许可的最大剂量 ② 各剂量的组间差距不应过大，以防漏检仅在非常狭窄范围内才有突变能力的某些外源化学物 * 阳性结果应当具有剂量-反应关系，即剂量越高，致突变效果越大。 并在一组或多组的观察值与阴性对照之间有显著差异（P0.05） 5.阳性结果的判定条件 * 基本概念：突变、遗传毒理学、致突变作用、致突变物 致突变的类型：基因突变、染色体结构异 常、染色体数目异常 致突变作用机制 突变的后果：生殖细胞突变，体细胞突变 机体对致突变作用的影响 致突变试验 * 第四节 机体对致突变作用的影响 * DNA执行高保真的