几个苹果新品种交不亲和基因的分离与鉴定.pdfVIP

摘要 种重要机制，在植物界普遍存在。苹果(胁如如mesrfc口Borkh)属于配子体自交不 亲和类型，是由一个基因座上的复等位基因一s基因控制的，生产中必须配置具有不 同S基因型的苹果品种作授粉树或用具有不同S基因型的苹果品种花粉进行人工辅助 授粉，才能获得预期的产量和果实品质。如果不了解品种的S基因型，在选配授粉品 种时会具有较大的盲目性。快速、早期鉴定苹果品种的s基因型是保证其丰产稳产的 一项重要基础工作。河北省近十年来新引进了美国8号、昂林、松本锦、华冠、南方 脆和斗南等苹果品种，关于它们的自交不亲和基因型国内外未见报道。为给以上苹果 品种确定栽培措施提供可靠的理论依据，作者于2004、2005连续两年对以上几个苹 果品种的S基因进行了研究，主要研究结果如下： 1．在基因组DNA提取方法上进行了改进，即：(1)在细胞核裂解之前加入提取液 降解。(2)用冰冻无水乙醇代替常规用的异丙醇沉淀DNA，防止盐类、糖类等与DNA 共沉淀。(3)抽提过程只用氯仿／异戊醇，加速有机相与无机相的分层，减少酚类的 污染。(4)DNA的收集采用低速离心法，避免了用钩子挑出对DNA造成的机械损伤。 (5)用双蒸H20溶解DNA，利于以后测序工作的进行。建立了改进c丁AB法，该 方法提取基因组DNA的A260／A280值在1．8～1 9之间，基因组DNA浓度均在2．54¨g／旺 在08％的琼脂糖凝胶电泳条件下检测，DNA呈一条整齐的亮带，无降解，点样孔无 残留、发亮现象。 2．在不同试材方面，以新梢顶端刚展开的嫩叶和成熟叶片为试验材料，用改进CTAB 8～1．9之间，DNA纯度高， 法提取基因组DNA，经纯化后样品的A260／A280值均在l RNA和蛋白质去除干净，但成熟叶片提耿的基因组DNA浓度较新梢顶端刚展开的嫩 叶提取的基因组DNA浓度低O．30u∥此。因此，基因组DNA提取以新梢顶端刚展开 的嫩叶为好。 3．所用试材方面，刚采集的新鲜样品、采集后直接放于一70℃冰箱中的样品和采集 后直接放于一40℃冰箱中一个月的样品提取的基因组DNA均较好。直接放于一30℃ 冰箱中一个月的样品，所提取的DNA出现降解，且有不同程度的变褐。 设计了弓I物Pl：5’一TTTACGcAGcAATATcAG．3’：P2： s26．、S27、和S”等全部s一等位基因，具有较高的S一等位基因特异性。 5．南方脆、华冠、昂林、松本锦和美国8号等5个苹果品种的基因组DNA的S基 因PcR扩增产物，经凝胶电泳检测，都含有一条340bp左右的片段，昂林含有～条 制性内切酶酶切，表明美国8号、昂林、松本锦、华冠、南方脆5个苹果品种s一等 位基因的基因型依次为：S9S27、sIS9、S9s9、s2S9、s2s9。 6．斗南苹果品种基因组DNA的S基因PCR扩增产物，经凝胶电泳检测，也含有一 片段长度为348bp，在NCBI中进行局部同源性比较与所有哪些信誉好的足球投注网站的序列相似性可达80 ％以上，与S2等位基因局部同源性达97．5％(不包括内含子)，但该片段没有s2等 位基因的限制性内切酶EcoRV酶切位点，将该片段确定为新的s一等位基因，在 GeneBank中接收号为D0219464。 7．用金冠、富士和嘎拉等苹果品种的花粉对斗南苹果进行田间授粉试验，花序坐果 率分别为：33％、68％和74％，花朵坐果率分别为：34％、64％和77％；用同样花粉 进行花柱半离体培养试验，其伸出花粉管的花柱比率分别为：38．46％、70．83％和86．67 ％，平均每根花柱伸出花粉管数分别为：1．15条、3．54条和2．83条，结果表明金冠、 富士和嘎拉均与斗南苹果亲和，说明斗南苹果不含有S1．、S2．、S3-、ss．、s9．等位 基因，与PCR．RFLP结果～致。 关键词：苹果新品种；自交不亲和；s基因：PcR．RFLP IdentificatioⅡof AlleIeofSomeNew IsoIationand SeIf-incompatibility Apple Cultiver8 Xue—mej Name：Zha