减毒羊痘病毒基复制非必需片段的筛选与鉴定.pdf

摘要 动物引起的一种急性、热性、接触性传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病， 我国将其列为一类传染病。 当前痘病毒活载体疫苗的研究是一个热点。痘病毒因其具有特异性，含有大量的复制非 必需片段可以插入大片段的外源基因等特点而引起了研究者的高度重视。羊痘病毒基因组全 长150Kb，基因组结构相当庞大，含有多个复制非必需区，可以供多种免疫源基因的插入， 进而构建成双价、多价疫苗。而构建羊痘病毒活载体疫苗，其首要的工作就是要进行复制非 必需片段的筛选。 本研究通过随机克隆的方法，将提纯后的羊痘病毒基因组肌耐ⅡI酶切，随机克隆到 pUcl8质粒中。通过限制性内切酶片段电泳分析和序列测定分析结果表明，克隆得到6个不 PUFl六个重组载体质粒，转染羊痘病毒感染的B既一21细胞。在X—gal存在条件下通过蓝白 斑筛选重组病毒的方法，筛选出了1个复制非必需片段，为进一步构建表达外源片段重组质 粒载体奠定了基础。 关键词：羊痘病毒，非必需片段，基因克隆。序列分析，转染 Abstract alld feVe血h锄d ca研pok(sheeppoxgoaq帕xXc越uedbyc印rip0)【vi八塔，is柚∞lIte is A o伍ceIfl咖ational comagio惦disea辩insh唧吖go砒．C印ripoxcl雏s砺ed拈I嘶gmupby des dise啪iIIChi慨 Epi瑚tie《oIE)柏d行嘟group on vector of Vin玛 capri-pox Cu盯cntly’smdiespox“兀Is Vaccin船a他higIII．911tsⅢ聆genome host rmmb盯ofnonessent．al a聘 fbatu瞄，including Re西。髓which ll嬲m锄y spec墒cj吼alaI翟|e vi]nls iIl mefIll．m js150kb imeningla唱eexogeno惜g即es．thecapripoxgeflo-me t0伽k呼II，In to identific砒．伽OftllenO∞sse呲ial Orderconsnllct vectorVaccims，tIle c印ripoxvims primary协st mgenions． 111e w越蚰dertal【e method．111c cPVstmiIl stIIdy by娜d响clonal temPc阳tllfe—semitive tllcll DNAw罄ex仃∽tedf}0mThe w私pIlmedbysucr0∞-density删ient．cen啊fIIgationgenomic c10∞d aIld6 CPV if哟PUCl8 clOn嚣 vinIs．tlle触gements pos廿ve