克瘟解毒制剂的全性评价及质量控制标准的建立.pdf

摘要 禽呼吸道疾病主要是由禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、鸡败血支原体等 感染所引起的一类急性、烈性呼吸道传染病，给养禽业造成重大经济损失。出口家禽呼吸道疾 病长期依赖化学药物预防和治疗，其带来的兽药残留、耐药性等问题严重影响了我国家禽产品 的贸易。养殖企业急切需要高效、低残留的药物来预防和治疗日益严重的家禽呼吸道疾病。 克瘟解毒口服液来源于长期防治临床家禽呼吸道疾病的验方。多年不断的筛选和改进逐渐 获得稳定疗效。在克瘟解毒口服液处方基础上，通过改进技术工艺制成克瘟解毒颗粒。为申报 克瘟解毒制剂新兽药证书，按照《兽药试验技术规范汇编》(2001年版)中相关申报药物制荆 毒性、稳定性和质量控制要求，本研究进行了克瘟解毒制荆的毒理学试验、稳定性试验、定性 及定量试验。具体实验内容如下： ①急性毒性试验选取体重ts～229的昆明小鼠50只，随机分为5个实验组，每组lO只， 用克瘟解毒口服液的5倍浓缩液1．19／ml灌胃，各组剂量分别O．169／109bw，0．219／109bw，0．279 nog bw。观察给药后动物的中毒症状和异常反应：亚慢性试验 bw，0．359／10sbw，0．469，109 选取体重15～20 g的昆明小鼠80只，按小鼠经口急性毒性试验‰的1／5、1／10、1／20设三 个剂量组，设一阴性对照组，连续灌胃28d。测定体重、血液生化指标，观察实质脏器病理学 变化。 ②小鼠微核试验选择30只成年雄性小鼠随机分5组，剂量分别为LD5D的1／2、1／4和1／8 药物组、蒸馏水阴性对照组、环磷酰胺阳性对照组，分别给药2次，间隔24h，来次给药后6Il 断颈处死动物，取出股骨中的骨髓细胞，显徽镜下检查。精子畸形试验试验分组和药物剂量同 微核试验，每组小鼠按上述剂量分别给药5d，每天给药1次。首次给药后的第35d用脱颈椎法 处死小鼠，取出两侧附睾，检查精子的畸形率。 ③致畸试验选择76只怀孕小鼠，随机分成5组，包括3个剂量组，阴性对照组和阳性对 照组。在小鼠妊娠的第18d称体重后处死孕鼠，剖腹取出子宫，记录黄体数、括胎数、死胎数、 吸收胎数及外观畸形胎仔数，弗观察内脏的病理学变化。 ④取克瘟解毒颗粒加蒸馏水溶解，分别进行鱼腥草、穿心莲和柴胡的定性鉴别：以样品中 穿心莲内酯为定量检测对象，检测波长225nm，优化条件，建立高效液相色谱法定量测定穿心 莲内酯。 ⑤取三个批次样品分别进行影响因素试验、加速试验和自然留样试验，考察样品外观和测 定穿心莲内酯含量。 结果显示：①息性毒性试验表明克瘟解毒制剂口服的LD5。值为259／kg体重。弧慢性毒性试验 中克瘟解毒口服液当给药量小Y2．5肼喑体重时，对昆明小鼠体重、生化指标和实质脏器无显著 影响。②小鼠微核试验和精子畸形试验均为阴性。③致畸试验中测定样品致畸指数为10～100。 ④定性检测颗粒样品鱼腥草，柴胡和穿心莲，结果重现性好、特异性强；高效液相色谱法测定 穿心莲内酯含量，其系统适用性好．线性关系良好。仪器的精密度、方法的稳定性、重现性较好， 样品中穿心莲内酯含量分布在160．O-165．跏g，g。⑤样品经影响因素试验、加速试验和室温留样 观察，各项指标均未有明显变化，但高温条件下样品出现吸湿，重量增加；室温保存6个月，样 品各项指标未受影响。 结论：克瘟解毒口服液属于实际无毒物质，长期使用当剂量达到2．59／kg时对小鼠没有毒性； 克瘟解毒口服液无明显的致突变作用，但有中度的致畸作用；建立的高效液相色谱法测定制剂中 穿心莲内酯含量具有简便快速、灵敏、定量准确的特点，且重复性好，可作为克瘟解毒制剂的质 量控制方法：克瘟解毒颗粒在强光、高温、室温条件下6月保存其物理性状和含量稳定，但在高 漫保存条件会受到影响。 关键词：克瘟解毒制剂，毒性试验，致突变试验，穿心莲内酯．高效液相色谱，稳定性试验 Ⅱ Abstract isa Avian disease caused aseriesof respiratory acute，widelyspreadepidemicmainlyby pathogens such