兔产气荚膜梭菌a型）α毒素原核表达产物免疫原性分析.pdf

摘要 兔产气荚膜梭菌病(甜os打j以Ⅷperfringens 病，以幼兔和青年兔发病率最高，死亡率可达100％，严重危害养兔业的发展。对于该 病主要致病因子。毒素的研究具有重要意义。 构建克隆载体pMDl8TC a毒素全基因从克隆载体pMDl8TC HTb中，构建表达载体 a亚克隆到表达载体pPRO-EX pPROIiTbCⅡ，并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了诱导表达研究。 HTa 将Ⅱ毒素基因部分序列从克隆载体pMDl8TCQ分别亚克隆到表达载体pPRO—Ex 和pET-30b中，获得重组表达载体pPROHTaP (DE3)pET30bP pET30bPa表达出的特异性产物和纯化产物均具有和a毒素抗血清反应的抗原特异性。 把以包涵体形式存在的表达的重组蛋白Qtoxinh和QtoxinB，以尿素变性，经复性、 了摸索。 免疫琼脂扩散实验的结果表明表达的重组蛋白dtoxinA和d 抗血清发生免疫沉淀反应：免疫家兔获得抗dtoxinB的抗血清和抗a 可以和A型产气荚膜梭菌强毒株产生的。毒素发生免疫沉淀反应。 本研究为兔产气荚膜梭菌病的流行病学调查、诊断试剂的开发以及基因工程疫苗的 研制提供了理论依据和物质基础。 关键词兔；产气荚膜梭菌(A型)；a毒素；表达；免疫原性 V I^n仉小iOGENICITYANAIYSISOF EXPRESSIONPRODUCT0FRABBIT PERFRI卜TGENS(TYPEA)ALPHATOXIN Abstract Rabbit diseasecausedClostridiam Clostridium+perfringensby onekindofenteralinfections．Thediseasecan toa11breeds (typeA)is spread and the ofthediseaseis inimmature agesrabbits，andincidence higher groups of andthemortalitycanreach10096．whichinfluencesthedevelopmentrabhits’ on toxin—themain factoris breedingdeeply．Thestudyalpha pathogenic important． toxin fromtheClostridium strainwas Alpha gene perfringens(typeA)NJ amplifiedbyPCRandclonedintothevectorpMD-18T，thentherecombinantplasmid awas showedthatthe toxinfrom pMDl8Tcconstructed．Sequenceanalysis alpha gene the strainwas1 andhada fraMewhichencoded398